脾臟單個(gè)核細(xì)胞懸液的制備

(1)大鼠斷頸處死后，無(wú)菌取脾置于消毒平皿中稱重;

(2)超凈工作臺(tái)上置10cm直徑無(wú)菌平皿，加入5～10ml D-hanks平衡液 ，置一80目的不銹鋼篩于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)中，用剪刀剪碎脾，用5ml玻璃注射器針芯輕輕捻磨脾臟，使分散的細(xì)胞濾過(guò)金屬網(wǎng)進(jìn)入平皿的液體中， D-hanks沖洗一次；

(3)用吸管吸取沖洗液，200目的鋼篩過(guò)濾一次后收集至離心管中；

(4)1000rpm，離心5～10min，棄上清；

(5)加入約1ml雙蒸水，吸管打勻后20s后加入等量的1.8%的NaCl溶液，然后加入大量D-hanks調(diào)節(jié)滲透平衡，以***紅細(xì)胞，但對(duì)白細(xì)胞沒(méi)有影響；用D-hanks液洗滌細(xì)胞2～3次，用含有1mM/L的谷氨酸胺、100IU/ml青霉素G、100μg/ml鏈霉素、10%的胎牛血清的RPMI－1640重懸細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5×106/ml，臺(tái)盼蘭染色檢測(cè)細(xì)胞存活率大于95％；

(7)接種至培養(yǎng)板或培養(yǎng)瓶中。

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