大鼠前體脂肪細胞的原代培養操作步驟
1. 乙醚麻醉致死大鼠（3～5 weeks）/小鼠（1～2月，年齡稍大可保證細胞數量）注：1、建議用大鼠做，小鼠取樣時，細胞數量偏少，較難養活。2、對于大鼠的年齡，好像要求不太嚴格，文獻上記載一般用3～5 weeks，但我用12 weeks的大鼠做也能成功。
2. 75%乙醇中消毒5～15min。
3. 無菌條件下取腹股溝部、腎、附睪周圍的脂肪組織，用Hanks（Hanks配置較麻煩，用PBS也無妨）反復沖洗3次。
4. 用剪刀將脂肪組織剪成1mm小塊，置于1mg/ml膠原酶中，37℃水浴（空氣）搖床100rpm消化1～3 h。
5. 1000 rpm離心5min，去除漂浮的脂肪細胞及培養液。
6 .沉積的細胞用紅細胞裂解液[2]再次配成細胞懸液，37℃孵育10 min，以去除污染的紅細胞。
7. 150μm尼龍網過濾，Hanks液洗滌并離心2次，每次1000rpm,5min。注：第六步和第七步我做時省略了。
8 .沉積的細胞用培養基A制成細胞懸液，調節濃度2×105/ml接種于培養瓶中。置37℃，體積分數5% CO2培養箱內孵育72hr后換液。
9. 一周以后可以傳代。
細胞的分化
細胞貼壁72 h后Hanks輕輕洗去培養瓶內未粘附的物質，換用培養基C誘導和維持脂肪細胞分化，3d以后更換為培養基B，以后每三天換一次液。
培養基A（增殖培養基）：
DMEM/F12 11.2 g/L
小牛血清 10 %
L-Glutamin 0.35 g/L
Hepes 15 mmol/L
NaHCO3 15 mmol/L
青霉素 100 U/ml
鏈霉素 100 μg/ml
培養基B（誘脂培養基1）：
DMEM/F12 11.2g/L
NaHCO3 15 mmol/L
Hepes 15 mmol/L
泛酸鹽 17 μmol/L
生物素 33 μmol/L
人轉鐵蛋白 17 μmol/L
青霉素 100 U/ml
鏈霉素 100 ug/ml
氫化可的松 100 nmol/L
胰島素 60 nmol/L
T3 0.2 nmol/L
培養基C（誘脂培養基2）：
DMEM/F12 11.2 g/L
小牛血清 10%
IBMX 0.25 mmol/L
L-Glutamin 0.35 g/L
Hepes 15 mmol/L
NaHCO3 15 mmol/L
青霉素 100U/ml
鏈霉素 100ug/ml
0.22 μm過濾除菌，-20℃保存。
紅細胞裂解液：
EDTA 0.1 mM
NH4Cl 150 mM
K2HPO4 5.7 mM
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