薄層色譜分離法
(一)薄層色譜法的特點
設備簡單,操作方便。只須一塊玻璃板和一個層析缸。分析原理與經典柱上色譜相同、但是在敞開的薄層上可以檢查混合物的成分是否分開可觀察??焖伲归_的時間短。比紙上色譜快速。一般紙上色譜需要幾小時至幾十小時薄層色譜一般只需十幾分鐘或幾十分鐘。使用無機吸附劑,薄層色譜可以采用腐蝕性的顯色劑,如濃硫酸、濃鹽酸和濃磷酸。對于特別難以檢出的化合物,可以噴以濃硫酸,然后小心加熱,使有機物碳化,顯棕斑點,紙紙上色譜則無法檢出。廣泛地選用各種固定相,比紙上色譜有顯著的靈活性。廣泛地選用各流動相,比氣相色譜靈活。
紙上色譜法斑點的擴散作用嚴重,降低了單位面積小樣品的濃度,降低檢出靈敏度。薄層色譜法擴散作用較少,斑點比較密集,檢以靈敏度較高。薄層色譜法適于分析小量樣品(一般兒到幾十微克,甚至小到上述的l-11),也適于大量樣品的分離(可以分離出幾毫克甚至幾十毫克組分)??梢圆捎枚喾N展開方式:如,雙向展開,多次展開,分步展開,連續展開;分離原理是的物理化學原理,例如,吸附色譜,分配色譜,離于交換,薄層電泳,薄層等電聚焦。適于分析熱不穩定,難揮發的樣品。
(二)方法原理
原理: 薄層色譜分離法是將固定相吸附劑均勻地涂在玻璃上制成薄層板,試樣中的各組分在固定相和作為展開劑的流動相之間不斷地發生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配過程。不同物質上升的距離不一樣而形成相互分開的斑點從而達到分離。
操作方法:同紙上色譜法
(三)固定相和展開劑
1. 固定相:
(1)硅膠:微酸性極性固定相,適用于酸性、中性物質分離(可以制備成酸度不同或堿性硅膠擴大使用范圍)
(2)氧化鋁:堿性極性固定相,適用于堿性、中性物質分離(可以制備成中性或酸性氧化鋁擴大使用范圍)
(3)聚酰胺:含有酰胺基極性固定相,適用于酚類、醇類化合物的分離
(4)纖維素:含有羥基的極性固定相,適用于分離親水性物質
根據制備方法不同,吸附劑又可以分為不同的活性,如:硅膠和氧化鋁可以分為五級
(四)應用(動畫演示)
硅膠G(含煅石膏作粘合劑)薄層,適當展開劑分離各種有機磷農藥。用硅膠G薄層,以丙酮―氯仿〔6:94)為展開劑,分離和測定食品中黃曲霉B1等致癌物質。
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