ELISA實(shí)驗(yàn)中的封閉液等常用試劑的配制
ELISA實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識
ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn)，蔗糖封閉的原理：
1. ELISA實(shí)驗(yàn)中，蔗糖本身沒有封閉作用;
2. 封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
3. 加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護(hù)劑”的作用。
4. 蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時(shí)進(jìn)行處理;那一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來驗(yàn)證。但多數(shù)選擇前者。
封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實(shí)驗(yàn)表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時(shí)候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。
tween的作用：雖然不能單獨(dú)封閉，但和BSA在封閉時(shí)會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-
ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置
ELISA實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置。
最近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn)，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?br style="box-sizing: border-box;"/>
（1）ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液
（2）ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液
（3）ELISA實(shí)驗(yàn)終止液
（4）ELISA底物緩沖液
（5）ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液
（6）ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液
（7）ELISC
試劑
（1）ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(PH9.6 0.05 M碳酸鹽緩沖液)：
NaHCO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000 ml
（2）ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15 M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5 ml
加蒸餾水至1000 ml
（3）ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液：
牛血清白蛋白(BSA) 0.1克
加洗滌緩沖液至100 ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
（4）ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(2 M H2SO4)：
蒸餾水178.3 ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7 ml。
（5）ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸)：
0.2 M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7 ml
0.1 M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3 ml
加蒸餾水50 ml。
（6）ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液：
TMB(10 mg/5 ml無水乙醇) 0.5 ml
底物緩沖液(PH5.5) 10 ml
0.75%H2O2 32 μl
（7）ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液：
ABTS 0.5 mg
底物緩沖液(PH5.5) 1 ml
3%H2O2 2 μl
（8）ELISA實(shí)驗(yàn)封閉液：
牛血清白蛋白(BSA) 5克
加洗滌緩沖液至100 ml。
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要精確，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。
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