光脫色熒光恢復技術(fluorescence recovery after photobleaching FRAP)

研究膜流動性的一種方法。首先用熒光物質標記膜蛋白或膜脂, 然后用激光束照射細胞表面某一區域, 使被照射區域的熒光淬滅變暗形成一個漂白斑。由于膜的流動性,漂白斑周圍的熒光物質隨著膜蛋白或膜脂的流動逐漸將漂白斑覆蓋，使淬滅區域的亮度逐漸增加, 最后恢復到與周圍的熒光光強度相等。

細胞膜蛋白的標記方法有很多種。可以用非特異性的染料,如異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)將細胞膜蛋白全部進行標記。也可用特異性的探針,如熒光抗體,標記特異的膜蛋白。膜蛋白一旦被標記就可用激光束進行局部照射處理,使熒光脫色,形成直徑約為1μm的白斑。若是可移動的膜蛋白,則會因蛋白的移動,使白斑消失,若是不能移動的蛋白.則白斑不會消失。

根據熒光恢復的速度, 可推算膜脂的擴散速度為每秒鐘為幾個微米，而膜蛋白的擴散速度變化幅度較大，少數膜蛋白的擴散速度可達到膜脂的速度，大多數蛋白的擴散速度都比膜脂慢，還有一些膜蛋白完全限于某一個區域。正是這種限制，使膜形成一些特定的膜微區(membrane domain),這些微區具有不同的蛋白組成和功能。這實際上是膜蛋白不對稱分布帶來膜功能的不對稱。

FRAP技術也有它的不足之處。第一,它只能檢測膜蛋白的群體移動,而不能觀察單個蛋白的移動。其次,它不能證明膜蛋白在移動時是否受局部條件的限制。為了克服這些不足,發展了單顆粒示綜(single-particle tracking,SPT)技術,可以用抗體金(直徑15～40 nm)來標記單個膜蛋白,然后通過計算機控制的攝像顯微鏡進行觀察。

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