脂肪酸的β-氧化

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br style="box-sizing: border-box;"/>（1）了解脂肪酸的β-氧化；

（2）通過(guò)測(cè)定和計(jì)算反應(yīng)液內(nèi)丁酸氧化生成丙酮的量，掌握測(cè)定β-氧化的方法及原理。

二、實(shí)驗(yàn)原理

根據(jù)β―氧化學(xué)說(shuō)，機(jī)體組織能將脂肪酸氧化生成乙酰輔酶A。兩分子乙酰輔酶A可再縮合成乙酰乙酸。在肝臟內(nèi)，乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成β- 羥丁酸。乙酰乙酸、β- 羥丁酸和丙酮總稱(chēng)為酮體。酮體為機(jī)體代謝的中間產(chǎn)物。在正常情況下，其產(chǎn)量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食時(shí)，血中酮體含量增高，尿中也能出現(xiàn)酮體。

本實(shí)驗(yàn)用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮可用碘仿反應(yīng)測(cè)定。在堿性的條件下，丙酮與碘生成碘仿。反應(yīng)式如下：

2NaOH+I₂ →NaIO+NaI+H₂ O

CH₃ COCH₃ +3NaOI→CHI₃ +CH₃ COONa+2NaOH

                            碘仿               

剩余的碘，可用標(biāo)準(zhǔn)硫代硫酸鈉滴定。

NaOI+NaI+2HCl→I₂ +2NaCI+H₂ O   I₂ +2Na₂ S₂ O₃ →Na₂ S₄ O₆ +2NaI

根據(jù)滴定樣品與滴定對(duì)照所消耗的硫代硫酸鈉之差，可以計(jì)算由丁酸氧化生成丙酮的量。

三、試劑與器材
恒溫水浴、微量滴定裝置、解剖用具、玻璃器皿等。

Locke氏溶液、0.1mol/L碘溶液、pH7.6,mol/L的磷酸緩沖液、

0.2mol/L丁酸溶液、15%三氯乙酸溶液、10%氫氧化鈉溶液、10%鹽酸溶液。

四、操作方法
處死動(dòng)物→制備肝糜→丁酸氧化反應(yīng)→碘仿反應(yīng)→碘滴定

五、關(guān)鍵步驟與注意事項(xiàng)

① 用新鮮肝糜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，確保肝內(nèi)酶活力。

② 注意滴定終點(diǎn)的控制，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。

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