細(xì)胞膜滲透性實驗原理與操作步驟
本實驗以雞血為材料，將紅細(xì)胞放置到不同的溶質(zhì)溶液中，通過引起紅細(xì)胞溶血時間不同，初步了解不同溶質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞膜 的速度情況，具體步驟如下：
一、實驗?zāi)康模?/strong>
了解細(xì)胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度。
二、實驗原理：
將紅細(xì)胞放入數(shù)種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞對各種溶質(zhì)的透性不同，有的溶質(zhì)可以滲入，滲入的溶質(zhì)能夠提高紅細(xì)胞的滲透壓，所以促使水分進(jìn)入細(xì)胞，引起溶血。由于溶質(zhì)透入速度互不相同，因此溶血時間也不相同。
三、實驗用品：
1. 器材：
試管，試管架，載玻片，蓋玻片，顯微鏡，吸管，離心機(jī) 。
2. 試劑：
0.85%NaCl溶液，0.085%NaCl溶液，0.8mol/L甲醇，0.8mol/L丙三醇，0.6%葡萄糖溶液，2% Triton X-100。
3. 材料：
雞血。
四、實驗步驟：
1. 取雞血2~3mL，加0.85%NaCl溶液4mL，在1000r/min條件下離心5min。(紅細(xì)胞壓積量不少于0.3mL，否則應(yīng)補(bǔ)加雞血)
2. 將上述離心的紅細(xì)胞按沉淀量配成50%濃度。(總體積量應(yīng)不少于0.6mL)
3. 取6支試管，分別加入如下溶液各3mL
① 0.85%NaCl溶液;②0.085%NaCl溶液;③0.32mol/L甲醇;④0.32mol/L丙三醇;⑤6%葡萄糖溶液;⑥10% Triton X-100。
4. 向上述6支試管中分別加入50%紅細(xì)胞懸液1滴，輕松混勻，觀察個試管是否有溶血現(xiàn)象發(fā)生(觀察時間1h)，記錄溶血時間并于顯微鏡下觀察溶液中細(xì)胞。
五、實驗結(jié)果：
1. 雞血紅細(xì)胞在不同溶液下的溶血現(xiàn)象。
表1 雞血紅細(xì)胞在不同溶液下的溶血現(xiàn)象
| 編號 | |||
| ①0.85%NaCl溶液 | |||
| ②0.085%NaCl溶液 | |||
| ③0.32mol/L甲醇 | |||
| ④0.32mol/L丙三醇 | |||
| ⑤6%葡萄糖溶液 | |||
| ⑥10% Triton X-100 | Triton X-100能去除細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，故能在較短時間內(nèi)使細(xì)胞發(fā)生溶血 |
1. 對于溶血較快的試管，用顯微鏡觀察時要注意滴加血液后立即鏡檢，否則將會因為細(xì)胞溶血太快而看不到細(xì)胞。
2. 即使細(xì)胞在等滲溶液中短時間內(nèi)未發(fā)生溶血現(xiàn)象，但是細(xì)胞長時間處于等滲溶液中也會發(fā)生溶血現(xiàn)象。
3. 發(fā)生溶血的細(xì)胞從形態(tài)上看，膜結(jié)構(gòu)上有一個個口，膜還是有結(jié)構(gòu)的，但是細(xì)胞比正常細(xì)胞小。
注意事項：溶血較快的溶質(zhì)，一定要掌握鏡檢時間;雖然是等滲溶液中，但由于細(xì)胞中某一物質(zhì)離子數(shù)高于細(xì)胞，部分物質(zhì)還是要進(jìn)入細(xì)胞，最好發(fā)生溶血現(xiàn)象。
