細(xì)胞活性測(cè)定方法介紹和使用探討
細(xì)胞活性測(cè)定方法有臺(tái)盼藍(lán)染色法、克隆（集落）形成法、3H放射性同位素?fù)饺敕āTT法等。其中MTT法以 其快速簡(jiǎn)便，不需要特殊檢測(cè)儀器、無(wú)放射性同位素、適合大批量檢測(cè)的特點(diǎn)而得到廣泛的應(yīng)用。
但MTT法形成的Formazan為水不溶性的，需要加有機(jī)溶 劑溶解，由于在去上清操作時(shí)會(huì)有可能帶走小部分的Formazan，故有時(shí)重復(fù)性略差。為了解決這個(gè)問(wèn)題，研究人員又開發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類：如 XTT、CCK-8（WST-8）等。
現(xiàn)就這三種四氮唑鹽類方法作一個(gè)簡(jiǎn)單介紹：
1、MTT法
MTT： 化學(xué)名： 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的 藍(lán)紫色結(jié)晶甲 （Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲 ，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于 一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
缺點(diǎn)：由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲 產(chǎn)物不溶于水，需被溶解后才能檢測(cè)。這不僅使工作量增加，也會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生影響，而且溶解甲 的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害。
2、XTT法
XTT：化學(xué)名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細(xì)胞還原成水溶性的橙黃色甲 產(chǎn)物。當(dāng)XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，其所產(chǎn)生的水溶性的甲 產(chǎn)物的吸光度與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。
優(yōu)點(diǎn)：
1、使用方便，省去了洗滌細(xì)胞；
2、檢測(cè)快速；
3、靈敏度高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；
4、重復(fù)性優(yōu)于MTT。
缺點(diǎn)：
XTT水溶液不穩(wěn)定，需要低溫保存或現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、CCK-8法或稱WST-8法
CCK- 8試劑中含有WST–8：化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽]，它在電子載 體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲 產(chǎn)物（Formazan）。生成的甲 物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢 測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。
優(yōu)點(diǎn)：
1、使用方便，省去了洗滌細(xì)胞，不需要放射性同位素和有機(jī)溶劑；
2、檢測(cè)快速；
3、靈敏度高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度；
4、重復(fù)性優(yōu)于MTT；
5、對(duì)細(xì)胞毒性小；
6、為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用。
缺點(diǎn):
1、與MTT相比，CCK-8和XTT的價(jià)格比較貴。
2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近，不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加。
