單向瓊脂擴散試驗（Single immunodiffusion test）

可溶性抗原與相應抗體在半固體瓊脂凝膠內擴散，二者相遇，在比例合適處形成白色沉淀。

單向瓊脂擴散試驗（Single immunodiffusion test）―人血清中IgG、IgA、IgM的測定。
    單向瓊脂擴散試驗是一種定量試驗，將抗體混合于瓊脂內，傾注于玻片或平皿上，凝固后在瓊脂上打孔，再將抗原標本加入孔內，經過一定的時間，在孔的周圍出現抗原抗體復合物形成的沉淀環，環的大小與抗原含量和擴散時間相關。用不同濃度的抗原制成標準曲線，則未知標本中的抗原含量即可從準標曲線中求出。本試驗主要用于檢查血清中各種免疫球蛋白和補體成份的含量。

【材料】
IgG、IgA、IgM免疫板、參考血清、待檢血清、微量加樣器（10微升）、量尺、紗布、生理鹽水、帶蓋方盤。

【方法】

1、免疫瓊脂板制備：將1.5%瓊脂（用PH8.2、0.05M的巴比妥緩沖液配成），加熱溶化，待瓊脂冷至56℃加入適量抗血清（抗血清最終稀釋度取決于抗血清所標化的稀釋度），混勻，制成厚1.5mm的瓊脂板，待瓊脂凝固后打孔，孔徑為3mm，孔距1～1.2cm。

2、稀釋參考血清及待檢血清：參考血清用0.5ml蒸餾水溶解后使用，參考血清、待檢血清稀釋按要求進行。

3、加樣：將上述稀釋參考血清分別滴入相應的抗體免疫板的一排孔內，其余孔滴加待檢的稀釋血清，每個檢樣加兩個孔，每孔滴加10微升。
4、擴散：將免疫板置水平濕盤內，放進37℃溫箱，IgG免疫板擴散24小時，IgA、IgM板48小時后取出置黑色背景前觀察結果，（如果沉淀環不清晰，也可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小時后觀察），必要時可以染色后觀察。
5、繪制標準曲線及血清標本中IgG、IgA、IgM定量測定：測量沉淀環直徑。沉淀環直徑的大小除與抗原量相關，還與分子量和擴散時間有關。這種沉淀環直徑與抗原含量的關系不是直線相關，而是對數關系，這種關系有兩種計算方法：
（1）Mancini曲線－適用于大分子抗原和長時間擴散（＞48小時）的結果處理。使用方格計算紙劃線，沉淀環直徑的平方與抗原濃度呈線性關系。公式表示：C／d²  ＝K（C＝抗原濃度，d＝沉淀環直徑，K＝常數）。
（2）Fehey曲線－適用于小分子抗原和較短時間（24小時）擴散的結果處理。使用半對數紙劃線，濃度的對數與沉淀環之間呈線性關系。公式表示：logC／d＝K（C＝抗原濃度，d＝沉淀環直徑，K＝常數）。

【結果】免疫球蛋白的含量用mg/ml表示，不同批號的參考血清其免疫球蛋白含量不一。