人卵巢成纖維細胞的性質用途及培養操作方法
一、背景
人卵巢成纖維細胞分離自卵巢組織采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來;成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。
剛分離的卵巢成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。
細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細胞大多分布于卵巢表面,其主要特點和功能:①成纖維細胞在體外易于培養;②卵巢損傷后,成纖維細胞能修復和重塑卵巢;③能在卵巢炎癥時有效控制炎癥擴散。
二、應用
用于人上皮性卵巢癌相關成纖維細胞促癌作用的研究:
卵巢癌相關成纖維細胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs),作為卵巢癌間質微環境中最主要的細胞成份之一,對腫瘤的生長、浸潤、轉移發揮重要的調節作用,對腫瘤微環境內的其他非腫瘤細胞,如細胞外基質、其他間質細胞也產生重要影響,在維持腫瘤微環境的動態平衡中發揮著重要作用。CAFs是一種有著多種來源的細胞群體,具有廣泛的異質性,是各腫瘤研究的熱點,人上皮性卵巢癌相關CAFs也需進行深入的研究。
探討上皮性卵巢癌中癌相關成纖維細胞與臨床病理特征間的相關性。
方法:平滑肌肌動蛋白(α-SMA)為CAFs特異性標志物,α-SMA表達的數量與強度可代表CAFs的存在數量,因此采用免疫組化通用型二步法檢測45例非癌卵巢組織中α-SMA表達和145例上皮性卵巢癌組織中α-SMA和基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達,并分析兩者的相關性及其臨床意義。
結果:
①正常卵巢組織除卵巢間質血管外,α-SMA不表達;在良性腫瘤間質中少部分陽性表達,且表達較弱;而在交界性腫瘤中,α-SMA表達強度介于良性腫瘤和惡性腫瘤之間。而在145例上皮性卵巢癌中,α-SMA均陽性表達,代表陽性的CAFs細胞在癌組織中的分布有3種方式;且Ⅲ~Ⅳ期卵巢癌間質α-SMA陽性表達強度明顯高于Ⅰ~Ⅱ期(P=0.016);有淋巴結轉移的卵巢癌明顯高于無淋巴結轉移卵巢癌(P=0.049)。
②正常卵巢組織中MMP-9不表達;而上皮性癌中癌細胞MMP-9陽性率為95.2%(138/145)。MMP-9在Ⅲ~Ⅳ期組明顯高于Ⅰ~Ⅱ期組(P=0.028),有淋巴結轉移組強陽性率高于無轉移組(P=0.033)。
③α-SMA在上皮性卵巢癌間質強陽性表達與癌細胞MMP-9的表達呈正相關(p=027)。