顯微鏡檢測法
原理
細胞凋亡發生時會出現一定的形態學特征,如胞膜有小泡生成,細胞固縮,核質濃縮,染色質凝聚,DNA降解,胞膜最終形成許多凋亡小體,然后被鄰近的巨噬細胞所吞噬。
材料與儀器
Hela細胞 Jurkat細胞
蒸餾水 盼藍
光學顯微鏡 倒置顯微鏡 熒光顯微鏡 共聚焦激光掃描顯微鏡 透射電子顯微鏡
步驟
利用光學顯微鏡,借助相應的染色方法,可以觀察細胞凋亡時會出現的一系列形態特征。常用的染色法包括臺盼藍、吖啶橙 / 溴化乙啶(AO/EB)、Giemsa 和 HE 法等。在光學顯微鏡下可以觀察到核固縮、質濃縮和凋亡小體等典型的凋亡現象。
電鏡形態學觀察法是一種比較經典、可靠的方法,被認為是確定細胞凋亡的金標準。電鏡下凋亡細胞表現為染色質凝集、核濃縮、核裂解、胞漿收縮和胞膜具有發泡現象及凋亡小體出現等。
注意事項
形態學方法的不足之處是它只能定性,不能有效的定量,而且判定時難免存在主觀性,故常作為其他檢測方法的基礎。
常見問題
細胞發生凋亡或壞死,其細胞DNA均發生斷裂,細胞內小分子量DNA片斷增加,高分子DNA減少,胞質內出現DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有 規律的發生在核小體之間,出現180-200DNA片斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區別。
來源于《細胞凋亡檢測的方法的研究進展》生物技術通報雜志。