瑞氏-吉姆薩混染法

原理

吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。

1）嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色，稱(chēng)為嗜酸性物質(zhì)；

2）細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱(chēng)為嗜堿性物質(zhì)；

3）中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱(chēng)為中性物質(zhì)。

PH對(duì)細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均分布蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅；在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色 偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對(duì)氫離子濃度十分敏感，染色用玻片必須清潔，無(wú)酸堿污染。配制必須用優(yōu)質(zhì)甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，以致識(shí)別困難，甚至造成錯(cuò)誤。

用途：適合大多數(shù)細(xì)胞組織的染色，包括血涂片、各種組織石蠟切片、冰凍切片、以及各種培養(yǎng)細(xì)胞。染色體顯帶、多種微生物的鑒別染色和細(xì)胞凋亡的檢測(cè)等。

材料與儀器

腫瘤細(xì)胞
甲醛 二甲苯 Gimsa染液 Sorensen磷酸緩沖液 香柏油 蒸餾水
光學(xué)顯微鏡 樹(shù)膠 載玻片 蓋玻片 洗瓶 離心機(jī) 離心管

步驟

一、試劑配制

1.  瑞氏染液配制

稱(chēng)瑞氏染料0.1 g于研缽，少量多次加入AR級(jí)甲醇至完全溶解，后補(bǔ)充至60 ml棕色瓶密封保存，可加3 ml甘油防止揮發(fā)。 

2.  吉姆薩染液配制

0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶?jī)?nèi)，56度，水浴90-120 min，當(dāng)染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇，充分搖勻后過(guò)濾，棕色瓶室溫可保存一周。

二、染色
1.  收集細(xì)胞制成懸液后涂片、晾干。懸浮培養(yǎng)細(xì)胞離心收集。貼壁細(xì)胞可直接培養(yǎng)在載玻片上。組織取材需機(jī)械零散。

2.  固定：以甲醇固定10 min.

3.  液化精液2 000/ rmin 離心10 min，等滲鹽水洗3遍，涂片后自然干燥。

4.  臨用前，瑞、吉染液按10：1混合，染色30-60 s。

5.  加等量PBS（pH6.9），再染10 min。

6.  自來(lái)水沖洗，自然干燥后，即可鏡檢，也可直接香柏油兼做透明與封片。

注意事項(xiàng)

1. 整個(gè)操作動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞。

2. 操作時(shí)注意避光，反應(yīng)完畢后盡快在一小時(shí)內(nèi)檢測(cè)。