HE染色法
原理
HE染色也稱蘇木精-伊紅染色,它是常規染色。蘇木精是一種天然染料,它本身并不能染色,在經氧化后變成蘇木紅才是真正的染料,蘇木對細胞核的親和力并不強,而在媒染劑的幫助下才能較好顯示細胞核,此時細胞核呈紅色,只有在堿性環境中,蘇木才變成藍色。伊紅Y是人工全盛染料,它可能是通過滲透或彌散作用完成染色的,因此和組織萬分結合是不牢固的。它對細胞質著色。
材料與儀器
腫瘤細胞
福爾馬林 BSS 蒸餾水 蘇木精液 伊紅染液 丙酮 二甲苯
光學顯微鏡 樹膠 載玻片 蓋玻片 洗瓶 離心機 離心管
步驟
一、具體操作
1. 準備組織切片。
2. 37℃溫BSS漂洗3次,每次2-3 min。
3. 中性福爾馬林固定30 min。
4. 蒸餾水漂洗1次。
5. 用蒸餾水稀釋的蘇木精液(1/20)染10 min。
6. 自來水洗。
7. 置人1%NaHCO3液中漂洗至藍紫色。
8. 伊紅染液染30 s-1 min。
9. 蒸餾水洗。
10. 迅速通過丙酮2次,每次3-5 min。
11. 通過2:1丙酮-二甲苯3次,每次1-2 min。
12. 純二甲苯5-10 min。
13. 樹膠封片,即可鏡檢。
二、結果評價
細胞核染藍紫色,細胞質桃紅色。組織細胞排列緊密,凋亡細胞與正常細胞分離,胞核皺縮,但因與組織分離,凋亡細胞略顯大。
注意事項
1. 整個操作動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞。
2. 操作時注意避光,反應完畢后盡快在一小時內檢測。
常見問題
腫瘤細胞一般體積大,是正常細胞的3倍以上,核大,核畸形怪狀,染色深,和分裂相多見,而且多見病理性核分裂相.腫瘤細胞排列松散,容易脫落。腫瘤細胞核漿比例失調,細胞漿染色改變,或者出現空泡,癌細胞背景則是多有壞死。光學顯微鏡是利用光學原理,把人眼所不能分辨的微小物體放大成像,以供人們提取微細結構信息的光學儀器。通過光學顯微鏡檢測腫瘤細胞形態有兩種方法:HE 染色法和瑞氏和杰姆薩混染法。