大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)-貼塊法
原理
運(yùn)用組織塊貼壁法進(jìn)行SD大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)，并用倒置相差顯微鏡觀察、HE染色后形態(tài)學(xué)觀察以及用免疫組化對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
材料與儀器
SD大鼠
PBS FBS DMEM
手術(shù)剪 手術(shù)鉗 眼科剪刀 眼科鑷子 大頭針 手術(shù)刀 培養(yǎng)皿
步驟
一、實(shí)驗(yàn)步驟
1. SD 大鼠(150-200 g)，斷頭，浸入75%的酒精中15 min。
2. 置入超凈臺(tái)中，將大鼠固定于殺鼠板上，在無(wú)菌條件下打開(kāi)腹腔，分離出胸主動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈， 摘出。
3. PBS 清洗3 遍，剝?nèi)ネ饽ぃ檬中g(shù)刀片刮去內(nèi)膜，留下中膜并將其移入1 mL 的培基中、剪成1x1 mm2 大小組織塊。
4. 再將PBS清洗組織塊，移入25 mL 的培養(yǎng)瓶中，用尖嘴彎管均勻貼好組織塊，放入37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)6 小時(shí)后，待組織塊貼壁后，再加入2.5 mL 培養(yǎng)液后放回培養(yǎng)箱中。
5. 隨后每3 天予以全量換液。
二、結(jié)果
3-5 天后可見(jiàn)組織塊周圍有細(xì)胞爬出，大約2 周后80－90%融合。
注意事項(xiàng)
第四步中最后加入2 mL 培養(yǎng)液時(shí)應(yīng)使其順無(wú)組織塊的皿邊緣緩慢流下，勿使組織塊吹下。
