人臍動脈平滑肌細胞培養實驗-貼塊法
原理
運用貼塊法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養,并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。
材料與儀器
臍帶
膠原酶消化液 胰蛋白酶 膠原酶 彈性蛋白酶 DMEM
眼科剪 滴管 離心機 培養皿 CO2培養箱
步驟
一、實驗步驟
1. 要用胎牛血清。開始用的是小牛血清,所以總是不成功,培養基換為 DMEM/F12,但后來我又換成 DMEM,也培養出來了。
2. 把臍動脈剪開很麻煩,因為它老是打彎,可以找個軟木塞,用大頭針固定,可用塊木板,因為有磨擦力,所以動脈可以固定在板上。
3. 對于新手來講,最麻煩的就是把組織快剪成1 mm3 大小小塊,可以找塊磨砂玻璃,切完再剪就 好多了。
4. 把剪碎的組織快移到培養瓶里,可采用類似牙科的刮匙,直接放進瓶里。加入2 mL 培養液, 一定不能放多,防止漂浮。然后用玻璃分針輕輕將小塊分離開。
5. 其它的基本就按文獻就可以了,如三個小時后翻瓶、換液時保留1/3。