正常細胞常規核型的標本制備實驗-微量全血培養
原理
采用微量全血培養人體外周血中淋巴細胞，在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素，破壞細胞紡錘體的形成，使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞，低滲處理，使細胞脹大，染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質，使染色體清晰且分散良好。再結合離心技術去掉紅細胞碎片，然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標本。
材料與儀器
外周血
640培養液 肝素溶液 秋水仙素 胰蛋白酶 EDTA PHA KCl 甲醇 冰醋酸 Giemsa原液 磷酸緩沖液 生理鹽水
超凈臺 鑷子 離心機 水浴箱 天平 離心管 顯微鏡 載玻片 平皿
步驟
1. 打開超凈臺紫外燈20~30分鐘。
2. 洗手、換潔凈白大衣后進入操作室。啟動超凈臺，點燃煤氣燈。
3. 用75%酒精棉球擦洗手、各種試劑瓶及操作臺面，然后將培養液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超凈臺。
4. 在超凈臺內將每個培養瓶裝入5 ml 培養液及0.2 ml PHA溶液，封好備用。
5. 用5 ml 注射器，7號針頭，先吸取少許肝素濕潤針筒，然后從肘靜脈抽血1~2 ml。
6. 每個培養瓶接種全血0.2 ml 左右輕輕搖動使血和培養液混勻。
7. 在培養瓶上標記好供血者姓名、性別、采血日期等，放入培養箱中37℃培養。
8. 每天輕輕震蕩培養瓶二、三次，防止血球沉積并保證血細胞與培養液充分接觸，促進細胞生長繁殖。
注意事項
試劑配方
500 單位／ml 的肝素溶液
10μg／ml 的秋水仙素溶液
0.25％胰蛋白酶一 0.02％EDTA 混合消化液
0.5mg／ml 的 PHA 溶液
0.075mol／L 的 KCl 溶液
磷酸緩沖液（pH6.8）
常見問題
1.人體外周血中淋巴細胞是成熟的免疫細胞，正常情況下處于 G。期不再增殖。PHA（Phytohemagglutinin，植物血凝素）是人和其它動物淋巴細胞的有絲分裂刺激劑，它能使處于 G0 期的淋巴細胞轉化為淋巴母細胞，進入細胞周期開始旺盛的有絲分裂。
2.人體染色體常規核型的分析，在今天的染色體研究水平上作為染色體結構異常的疾病診斷已經失去意義，但對染色體數目異常仍具有診斷上的價值，尤其是起著分析其它幾種顯帶核型的橋梁作用。通過常規核型的分析必須掌握三點：
（1）會分組；
（2）了解各組染色體的基本形態特征；
（3）會計數數目和鑒定性別。
