細胞內堿性蛋白和酸性蛋白的顯示

原理

由于不同的蛋白質分子所帶的堿性和酸性基團的數目不同，在pH值不同的溶液中，蛋白質分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下，整個蛋白質所帶負電荷多，則為酸性蛋白質；帶正電荷多，則為堿性蛋白質。據此，可將標本經三氯醋酸處理提出核酸后，用不同pH值的固綠染液分別染色，細胞內的酸性蛋白和堿性蛋白質顯示出來。

材料與儀器

小白鼠
PBS緩沖液 丙酮 二甲苯 乙醇 三氯醋酸 固綠 硫酸銅 聯苯胺混合液 番紅 過碘酸酒精液 Schiff氏酒精液 亞硫酸水 蘇木精 Carnoy固定液
光學顯微鏡 解剖器材 蠟盤 載玻片 吸水紙 染色缸 蓋玻片 水浴箱

步驟

一、方法

1.  以破壞脊髓法處死蟾蜍，將其腹面向上放人蠟盤中，剪開胸腔，打開心包。小心將心臟剪一小口，取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端，推片，按此法制備二張血涂片，室溫晾干。

2.  將涂片作好標記放在70%乙醇中固定5分鐘，室溫晾干。

3.  放入5%三氯醋酸中60℃30分鐘，抽提出核酸。

4.  清水沖洗多次（3分鐘以上），以沖去痕跡的三氯醋酸。

5.  濾紙吸干玻片上水分。

6.  一張片放入0.1%堿性固綠（pH8.0~8.5）中染色10~15分鐘，另一張片放入0.1%酸性固綠（pH2.0~2.5）染色5~10分鐘。

7.  清水沖洗，蓋上蓋片鏡檢。

二、結果

經堿性固綠染色片中，胞質、核仁不著色，細胞核大部分被染成綠色，是為堿性蛋白質存在處。經酸性固綠染色片中，因胞質和核仁中有酸性蛋白，被染成綠色。