淋巴細胞增殖功能的測定實驗
原理
T細胞、B細胞表面具有識別抗原的受體和有絲分裂原受體，在特異性抗原刺激下可使相應淋巴細胞克隆發生增殖。植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA），抗CD2、抗CD3 McAb作為多克隆刺激劑可選擇性地刺激T細胞增殖；而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌體（SAC）、脂多糖（LPS，對小鼠有作用）則刺激B細胞發生增殖；美洲商陸（PWM）、腫瘤刺激劑PMA對T、B細胞的增殖均有刺激作用。最近發現，integrin家族中VLA組中某些受體與相應配體結合后也能活化T細胞。目前臨床上最常選用PHA刺激PBMC，根據形態學或氚標記胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）摻入率測定T細胞的增殖水平。
材料與儀器
PBMC
閃爍液 RPMI1640 CO2孵箱
細胞收集儀 β液閃儀
步驟
1. 無菌從肝素抗凝血中分離外周血單個核細胞（PBMC）洗滌后用10％FCS RPMI1640調整細胞數為1～2x106/ml
2. 加入96 孔培養板中，1～2x105 細胞/100 ul/孔，每組設3孔。加入最適劑量PHA，100 ul/孔，同時設不加PHA陰性對照。如觀察細胞因子（如IL-2）或其它刺激物（PMA）對增殖功能的調節作用，則根據加入因子的濃度而確定加入量，一般每孔最終體積為200 ul，37 ℃、5 ％ CO2孵育，66 h
3. 每孔加入0.5～1 uci 3H-TdR（50ul），繼續培養6～12h
4. 用DYQ-Ⅱ型多頭細胞收集儀收集樣品于"9999"型玻璃纖維濾紙上
5. 烤干后β液閃儀計數
6. 計算
（1）增殖水平直接用CPM值表示。
（2）也可用刺激指數（SI）表示
PHA（或實驗組）cpm-機器本底
SI＝───────────────
陰性對照組cpm-機器本底
注意事項
1. 注意無菌操作。
2. PHA、ConA、PWM、LPS等在正式實驗前均需摸索最適劑量或亞適劑量。廠家和批號不同絲裂原作用常有很大差別，如Wellcome公司PHA終濃度最適劑量為1～3 ug/ml，而廣州醫工所PHA約為20～100 ug/ml。
3. 根據實驗需要，對不同種（人、小鼠、大鼠、兔、狗等）不同來源淋巴細胞（胸腺、脾臟、淋巴結、扁桃腺、外周血等）均應進行最適細胞濃度、圈養時間和刺激物濃度的摸索。
常見問題
來源：醫學基礎免疫學實驗指導，主編金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界圖書出版社，1990。
