呼吸道感染病毒標本的采集與處理
簡介
針對呼吸道病毒感染的標本有鼻／咽拭子（nasopharyngeal swabs，NP）、痰（sputum）、鼻咽抽吸物（nasopharyngea aspirates，NPAs）、支氣管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage，BAL）以及含漱液等。
材料與儀器
器材：
①一次性無菌手套
②采集管
試劑：
①材料：采集標本
②標本緩沖液
步驟
呼吸道感染病毒標本的采集與處理根據樣本類型，其基本過程可分為如下幾種：
一、呼吸道感染病毒標本的采集
1．鼻拭子（nasal swab）的采集方法是：患者坐下，頭后傾，從無菌包裝中取出拭子，輕柔地以平行于上腭的方向插入鼻孔，在鼻腔內側黏膜上轉動3～5次，旋轉拭子慢慢退出鼻孔，雙側鼻孔用同一根拭子進行采集后將拭子頭插入病毒傳送管中送檢。
2．咽拭子的采集方法是：患者坐下，頭后傾，張大嘴，由采樣者用壓舌板固定舌頭，拭子越過舌根到咽后壁及扁桃體隱窩、側壁等處，反復擦拭3～5次（避免觸及舌、口腔黏膜和唾液），取出后將拭子頭插入病毒傳送管中（一般4～5 ml采樣液），將拭子頭部與管壁接觸幾下，盡量使標本保存在采樣液中，用手捏拭子尾部折斷棄去，最后確保采樣管蓋子旋緊，并核對標本信息送檢。
拭子好采用病毒傳送管運送。含漱液的采集方法是用10 ml洗液漱口，漱口時讓患者頭部微后仰，發“ao”聲，讓洗液在咽部轉動，然后，用平皿或燒杯收集洗液。鼻洗液：患者取坐姿，頭微后仰，用移液管將1～1.5 ml洗液注入一側鼻孔，囑患者同時發“K”音以關閉咽腔。然后讓患者低頭使洗液流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復此過程數次。洗兩側鼻孔最多可用10～15 ml洗液。
3．痰液采集方法有幾種，自然咳痰法最常用，晨痰最佳。患者清晨起床后，用清水或冷開水反復漱口，用力深咳，直接吐入無菌采集容器中，標本量應≥1 ml，立即送檢。痰量少、無痰或咳痰困難者，可采用誘導咳痰法，于超聲霧化器霧化杯中加入4％ NaCl溶液40 ml，患者霧化吸入高滲鹽溶液15～25分鐘，囑患者漱口，用力咳出深部痰，收集入無菌采集容器送檢。
有條件還可采用支氣管鏡采集，用常規支氣管鏡在有痰和病變部位用導管吸引直接取得標本，置于無菌采集容器送檢。對小兒，可用彎壓舌板向后壓舌，將拭子伸入咽部，小兒經壓舌刺激咳嗽時，可噴出肺部或氣管分泌物，將粘在拭子上的分泌物置于無菌采集容器。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發咳痰取樣。
4．鼻咽抽吸物 用商品化的黏液抽吸器的導管在鼻尖到外耳道中間的位置連接，不停地轉動導管，采用負壓100 mmHg持續15秒的間歇性抽吸后慢慢退出。另一鼻孔重復上述操作。粘在導管腔內的分泌物用無菌采集容器收集，另一管通過1 ml病毒運輸液沖洗轉移到黏液收集管中。
5．支氣管肺泡灌洗液 屬于下呼吸道感染標本，患者經局部麻醉后將纖維支氣管鏡插入左肺舌段或右肺中葉支氣管，將纖維支氣管鏡上端契入支氣管分支開口，經氣管活檢孔緩緩注入少量37 ℃滅菌生理鹽水，每次30～50 ml，總量100～250 ml。每次注液后以低負壓吸引器吸出，負壓不可過大、過猛。操作過程必須嚴格執行無菌操作，回收的灌洗液分別收集于用硅油處理過的容器，容器周圍可用冰塊包裹，及時送檢。
6．血液 通常采血部位為肘靜脈，將止血帶扎在靜脈取血部位的上方，采血部位的局部皮膚用消毒液由采血部位向外周嚴格消毒，消毒后不可接觸采血部位，待消毒液揮發后，采用商品化的一次性注射器或真空采血管采血5～8 ml。
7．胸腔穿刺液 由臨床醫師進行常規穿刺術抽取5～10 ml穿刺液置于無菌采集容器中，立即送檢或置于4 ℃冰箱保存。
二、呼吸道感染病毒標本的處理
呼吸道標本和胸腔穿刺液用于病毒檢測前需要進行分裝，如標本黏液成分較重，可進行液化處理，以提高檢出效率。標本上清液可直接接種或低溫保存。
用于病毒培養的標本，如懷疑有細菌污染時，可在離心的基礎上，用0.2 μm濾器將標本過濾后使用，或者在標本中加入青霉素和鏈霉素等抗生素。血液標本應2000～2500 r／min離心5分鐘收集血清，血清可在4 ℃存放1周，長期保存置-20 ℃。
注意事項
1．采樣時間 一般在發病初期或急性期采樣，較易檢出病毒。咽、鼻拭子或含漱液在發病的最初3天采集。檢測病毒特異性IgG抗體需要采取急性期與恢復期雙份血清，第一份盡可能在發病后立即采取，最遲不超過發病后7天；第二份恢復期血樣應在發病后2～4周采取，單份血清一般不能用作診斷。尸檢標本在患者死亡后盡早隨尸檢采集。
2．采集要求 在采樣拭子的選擇上，最好用植絨拭子（flocked swabs），采樣頭由尼龍絨毛和粘膠兩部分組成，對人體和微生物無害，能最大限度地增加標本的采集釋放量，其上皮細胞的采集數量比常規棉拭子高出2～3倍。
在采樣方法選擇上，年齡較大的兒童和成年人常采集鼻咽拭子，而嬰幼兒通常采集鼻咽抽吸物。在咽拭子采樣前，應評估采樣對象咽喉部有無分泌物，能否采集到合格的標本以及是否愿意配合采樣。采樣前應仔細檢查采樣管是否密封，有無破損及采樣液是否發生變色或混有雜質，并注意采樣管的標識。死亡病例，采集的病變組織應保存于50％的甘油緩沖鹽水中。
3．標本的包裝與運送 采集的標本須放在大小合適的帶螺旋蓋且內有橡膠圈的塑料管里，擰緊，將密閉后的標本放入大小適合的塑料袋內密封，每袋裝一份標本。
直接在塑料管上用油性記號筆寫明標本的種類、采樣時間、編號、患者姓名，同時將標本有關信息填入送檢登記表，連同塑料管用另一塑料袋密封送檢。如果標本需運至異地檢驗，則應將裝標本管的密封袋放入專用運輸箱內，放入冰排，用具吸水和緩沖能力的材料填充，專人運送至檢測單位。
如果標本不能立即送檢，可在4 ℃短期保存幾天，如需要保存更長時間才能檢測，標本應盡快在-70 ℃或以下保存，對大多數呼吸道感染病毒，如果24小時內不能檢測，建議放-70 ℃或以下保存。呼吸道合胞病毒凍存后，感染力會大大下降，其標本采集后應立即接種細胞。
