病毒的血清學(xué)診斷

簡介

血清學(xué)方法可以用來確定呼吸道病毒感染，但因這需要收集至少相隔兩周的雙份血清來評價（急性期和恢復(fù)期），故很少用于臨床診斷，目前該方法常用于流行病學(xué)調(diào)查和臨床研究。血清抗體水平增加4倍或更多，被認(rèn)為是感染的證據(jù)，有多種方法可以使用。

材料與儀器

器材：
①一次性無菌手套
②標(biāo)本采集管
③棉簽拭子
④PCR儀

試劑：
①材料：待采標(biāo)本
②PBS緩沖液

步驟

病毒血清學(xué)診斷根據(jù)病毒種類不同，其基本步驟可分為如下幾種：

1．補體結(jié)合實驗 補體結(jié)合試驗（CF）是相對容易實施的檢測法，已能檢測流感病毒，呼吸道合胞病毒，副流感病毒，腺病毒和冠狀病毒229E和OC43，這些檢測法以屬或型特異性抗原表位為靶目標(biāo)。

由于異型反應(yīng)和中和反應(yīng)所測得的缺乏血清反應(yīng)相關(guān)性，CF試驗尚用于鼻病毒和腸道病毒的檢測。針對新近發(fā)現(xiàn)的病毒如人偏肺病毒和新的冠狀病毒的CF檢測法還有待進一步研究。

2．ELISA操作相對容易，可重復(fù)性好，可用于測定血清或者呼吸道分泌物中的抗體。使用的抗原可以是病毒顆粒，或者病毒的蛋白，因此檢測的適應(yīng)范圍廣，即可是屬特異性，也可是型特異性，方法經(jīng)過改良后可用于感染或接種疫苗后特定免疫球蛋白（IgG抗體，IgA抗體，IgM抗體）的測定。

3．血凝素抑制試驗 可對有血凝素活性的病毒進行檢測，包括流感病毒、副流感病毒、冠狀病毒OC43、一些腺病毒、鼻病毒和腸道病毒。不是所有的病毒都會使同一動物的紅細(xì)胞凝集，所以實驗中紅細(xì)胞的選擇是基于病毒血凝素的凝集范圍決定的。

血凝素抑制試驗最常用于流感病毒和副流感病毒檢測，通常使用雞或火雞紅細(xì)胞來檢測流感病毒血凝素抗體，需注意的是測定H1N5的抗體時推薦使用馬血細(xì)胞。

豚鼠或人紅細(xì)胞可用于副流感病毒血凝抑制試驗。進行血凝抑制實驗前，用受體破壞酶預(yù)處理待檢人血清，以除去人血清中的非特異性抑制因子，避免出現(xiàn)血凝素抑制試驗的假陽性。

4．中和試驗是基于血清中和抗體能阻止病毒復(fù)制的原理設(shè)計的實驗，適用于可培養(yǎng)病毒中和抗體的檢測。中和抗體的量可通過系列稀釋的血清與已知定量病毒作用后，通過細(xì)胞病變的減少，或者培養(yǎng)物血凝效價的降低，或者空斑形成單位減少來顯示。