蟲媒病毒的病毒分離與鑒定
簡介
病毒分離是判定蟲媒病毒感染的金標準，但是否能分離到蟲媒病毒與標本采集的時間密切相關。
原理
定蟲媒病毒感染的基本原理是發病后 5 天以內采集的標本的病毒分離率遠遠高于 5 天以后采集的標本。盡管病毒分離是確診病原最可靠的方法，但因至少需要 1 周時間才能出結果，相對費時、煩瑣，因此不適宜作為蟲媒病毒感染的早期診斷方法。
材料與儀器
器材：乳鼠、雞胚
步驟
1. 乳鼠分離
乳鼠腦內或腦腹內聯合接種分離是古老的登革病毒分離方法，分離過程中需多次傳代才能使乳鼠發病。該法實驗成本高，耗時長，分離陽性率低、需特殊的生物安全設備，現已極少使用。
2. 蚊蟲分離
蚊幼蟲腦內接種或成蚊胸腔接種是最敏感的登革病毒分離方法，敏感的蚊種主要有埃及伊蚊、白紋伊蚊、華麗伊蚊等，一般接種后 4~5 天即可分離到登革病毒。用蚊蟲作病毒分離，即使血清中含有一定效價的抗體，也能分離出病毒，雄蚊和雌蚊均具有較高的敏感性。
3. 雞胚分離
蟬傳腦炎病毒在雞胚中發育良好，一般可選擇 7 日齡前后的雞胚分離病毒。
4. 細胞分離
① 登革病毒等蚊媒病毒：細胞分離包括哺乳動物細胞分離和蚊蟲細胞分離。哺乳動物細胞主要有恒河猴細胞（LLC-MK2）、非洲綠猴腎細胞（Vero）和金黃地鼠腎細胞（BHK21），其中以 LLC-MK2 細胞較為敏感；蚊蟲細胞主要有白紋伊蚊細胞（C6/36）。偽盾紋伊蚊細胞（AP61）和安漢巨蚊細胞（TRA-284），其中以 TRA-284 細胞較為敏感，但以白紋伊蚊傳代細胞 C6/36 細胞最常用。與其他方法相比，細胞分離比乳鼠分離有更高的分離率，操作更簡便、成本更低，雖然分離的敏感性不如蟻蟲分離，但細胞的維持相對容易，細胞病變易于觀察、可產生大量的病毒等，因此，細胞分離法特別是蚊源的 C6/36 細胞在目前蟲媒病毒的分離上應用最廣泛。
② 螂傳腦炎病毒：雞胚成纖維細胞和豬腎細胞接種病毒能產生病變及空斑，且比小白鼠腦內接種更敏感。羊腎細胞與小白鼠的敏感性大體相同，也可用于分離病毒。
