細菌的裂解氣相色譜鑒定實驗
原理
氣相色譜技術(shù)（gas chromatography，即 GC）是色譜技術(shù)的一種，其試驗儀器氣相色譜儀主要由載氣系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、色譜柱、檢測器和記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置等組成，如圖 1。
圖 １ 氣相色譜儀示意圖
該技術(shù)的基本原理是試驗樣品中的各組分。隨流動相（氣體）經(jīng)過裝在色譜柱中的固定相而流動，吸附力或溶解性弱的組分很難被吸附或溶解在固定相中，流動快，首先流出色譜柱，而吸附力或溶解性強的組分則后流出色譜柱，因此樣品中各組分便能分離開，被分離開的組分依次使檢測器能檢測到，記錄儀在記錄紙上則依次記錄被分離開的組分，每一組分呈一色譜峰，或同時由數(shù)據(jù)處理裝置直接計算和打印出試驗結(jié)果。根據(jù)注入樣品開始到出現(xiàn)色譜峰最高點為止的時間（稱為保留時間 tR）、色譜峰的高度 h 和色譜峰寬度 W 等試驗數(shù)據(jù)，或其他補充試驗的數(shù)據(jù)，可以對樣品中各組分定性和定量。氣相色譜技術(shù)分離樣品組分的原理見示意圖 2。
圖 ２ 氣相色譜分離樣品組分的原理示意圖
材料與儀器
二株革蘭氏陰性細菌 二株革蘭氏陽性球菌 二株芽孢桿菌
無菌水 生理鹽水
氣相色譜儀 進樣系統(tǒng)的配件裂解爐 氫離子火焰檢測器 不銹鋼色譜柱 離心機
步驟
1. 將菌株分別接種在瓊脂營養(yǎng)斜面上，37℃ 培養(yǎng) 24 h，用接種環(huán)取下菌苔，切勿帶有培養(yǎng)基，將菌苔放入盛有生理鹽水的塑料小離心管中，1000 r/min 離心 5min，再用無菌水洗滌菌體三次，洗滌時的離心速度、時間都同前，只是最后一次離心10 min，棄去洗滌液，然后在電吹風(fēng)氣流下脫水 15 min，制成待鑒定的細菌樣品。
2. 選擇裂解色譜條件為：裂解溫度 800℃，裂解時間 10 s，進樣口溫度 260℃，檢測器溫度 280 ℃，拄起始恒溫 80℃ 恒溫 4 min 后，6 ℃/min，氫氣 45 ml/min，空氣 450 ml/min，記錄儀紙速 8 mm/min。
3. 待調(diào)試色譜儀運轉(zhuǎn)正常后，取待鑒定的細菌樣品 1.5 mg，置于裂解頭鉑舟內(nèi)，然后插入裂解爐內(nèi)，停留裂解 10 s，按上述選擇的裂解條件進行試驗，每個樣品在色譜儀中分離時間為 25min。
每個樣品的色譜鑒定，必須嚴(yán)格保持裂解色譜條件一致。
4. 從記錄儀上取下記錄有樣品各個色譜峰的記錄紙，或從數(shù)據(jù)處理機上取下記錄有直接計算出的樣品各個色譜峰分析結(jié)果的記錄紙。
