從酵母細胞中分離質粒
原理
在非選擇性生長條件下，大多數大腸桿菌/酵母菌穿梭載體的丟失頻率大約1%。 在本方案中含質粒的酵母菌株接種于非選擇性平板上以分離質粒并可得到單菌落。然后通過影印到選擇性平板上可以鑒別丟失了質粒的菌株
材料與儀器
含質粒的酵母菌株
YPD或其他非選擇性液體培養基及平板 CM缺失成分平板
滅菌絨布及影印模板
步驟
1) 挑取幾個含質粒的酵母菌單克隆，分別接種于10 mL非選擇性培養基，30℃培養過夜。如果沒有其他的選擇，可以用YPD培養基，如果要保留其他不穩定遺傳標志或質粒，可以用添加了與可能丟失的可選擇標志相應的營養成分的確定成分培養基。
2) 涂布在相應的非選擇性平板上以得到單菌落，30℃培養2天。
3) 影印到選擇性平板上以確定丟失了質粒選擇標志的菌落。將選擇性平板和非選擇性主平板置30℃培養過夜。
