肥達氏試驗

原理

將已知的傷寒桿菌“O”抗原、“H”抗原和甲型、乙型副傷寒桿菌“H”抗原與病人血清混合作試管定量凝集試驗，以檢測病人血清中的相應(yīng)抗體，臨床上作為診斷傷寒和副傷寒的參考依據(jù)。

材料與儀器

待檢血清 診斷菌液 蒸餾水 試管 試管架 微量移液器 吸管 水浴箱

步驟

1. 將大小一致的小試管放置試管架，4排，每排8支，作好標記。

2. 在所有32支試管中分別加入生理鹽水0.5ml。

3. 另取1支試管，加生理鹽水1.8ml和病人血清0.2ml，充分混勻，得到1：10稀釋血清。在每排第1管中分別加入該1：10稀釋血清0.5ml，充分混勻，即得1：20稀釋血清。

4. 對倍稀釋病人血清：分別從每排第1管中取0.5ml血清加入本排第2管，混勻，再從第2管吸取0.5ml血清加入第3管，混勻。依次類推，直至每排第7管中加入稀釋血清0.5ml，混勻后從每排第7管中吸取0.5ml丟棄。從而每排1～7管得到1：20、1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280的對倍稀釋血清。第8管不加血清，只加生理鹽水作陰性對照。

5. 加入菌液：各排從第8管開始，由后往前每管加入診斷菌液0.5ml。
第1排各管加入傷寒桿菌“H”菌液。

第2排各管加入傷寒桿菌“O”菌液。

第3排各管加入甲型副傷寒桿菌“H”菌液。

第4排各管加入乙型副傷寒桿菌“H”菌液。

此時，各血清管的血清稀釋度又增加了1倍，依次為1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280、1：2560，每管總量為1ml。

常見問題

結(jié)果判定與書寫
根據(jù)凝集反應(yīng)的強弱，分別用“＋＋＋＋”、“＋＋＋”、“＋＋”、“＋”和“－”表示。

1. ＋＋＋＋：完全凝集，上層液體清澈透亮，細菌完全凝集沉淀于管底。

2. ＋＋＋：大部分凝集，上層液體基本透明，細菌大部分（75%）凝集沉淀于管底。

3. ＋＋：中度凝集，上層液體半透明，管底有明顯凝集沉淀物。

4. ＋：弱凝集，上層液體混濁，管底僅有少量凝集沉淀物。

5. －：不凝集，液體呈乳狀，管底有明顯凝集沉淀物。
判斷血清凝集效價：先要看各排對照管，在對照管均不發(fā)生凝集時，依次觀看各試驗管，以出現(xiàn)明顯凝集現(xiàn)象（＋＋）的血清最高稀釋倍數(shù)作為該血清的凝集效價（抗體效價）