乳鼠心肌細胞培養(yǎng)方法詳述

一、材料

所需液體：Hanks液、低糖DMEM液、高糖DMEM液、胰酶消化液、雙抗液、碳酸氫鈉液、鹽酸液。

試劑 Trypsin, SDS, DMEM 均購于 Sigma Chemical Co.小牛血清購于杭州四季青生物制品有限公司，其余均為國產(chǎn)分析純。

取鼠：標準SD大鼠，鼠盆用棉鋪好，取鼠。

物品：白大衣、飯盒

小剪子、小鑷子（4套）（一套剪皮膚、一套開胸取心，一套剔除心緣纖維組織，一套剪碎心臟）

瓶皿（2套）[兩個小圓培養(yǎng)皿，培養(yǎng)皿內(nèi)加DMEM液，先后裝取出的心和剔出纖維組織后的心] [一個小燒杯裝碘酒和酒精棉球]

250ml燒杯3個[一個用于水浴，事先加好水，最好是一或二蒸] [一個裝0.1％新潔爾滅150ml左右，消毒小鼠]

500ml燒杯1個，用作廢液缸。

50ml燒杯3個（剪碎心肌組織，最后配液）

三角燒杯（50ml）+小轉(zhuǎn)子（小轉(zhuǎn)子，酒精擦，雙蒸水沖后，再把酒精徹底沖掉后用三角燒杯高壓）

離心管及帽（12-14個），兩個試管

吸管 （5~8個）；大鑷子（兩把，持物，例夾棉球等）

臺面：磁力攪拌器、紗布（事先用于托盤裝0.1％新潔爾滅浸泡）、試管架、泡沫塑料板、五個針頭（不用消毒）75％酒精棉球及碘酒（消毒棉球，泡酒精、碘酒）大鑷子兩把（一把夾棉球，一把取鼠）、3個250ml燒瓶（一個裝一蒸水，一個裝新潔爾滅，另一為空的備用）1個500ml燒瓶（廢液缸）、溫度計、PH試紙（事先調(diào)PH值）、酒精燈、打火機/火柴、載玻片（5-10個）[用于培養(yǎng)前看接種密度及消化后看細胞密度]、注射器5ml 6個（胰酶、DMEM、小牛血清）1ml 2個（雙抗液）20ml備用 2個、微量加樣器 1000ml及500ml

以上物品均用紫外線照30分鐘。

另外準備手套、帽子、口罩、24孔培養(yǎng)板、離心機、未凍藥品及DMEM、HCL、NaHCO3、小牛血清。

事先把顯微鏡、離心機、磁力攪拌器電源插好。檢查酒精燈是否有酒精，碘酒和酒精棉球是否夠用。先把物品遞入，后穿大衣、帽子和口罩。然后把酒精燈打開，把瓶皿擺好，再用一個瓶皿裝酒精棉球。

二、培養(yǎng)方法：

事先檢查顯微鏡、磁力攪拌器及離心機是否好用，提前三小時把小牛血清、胰酶、抗生素拿出來化開。其余未凍藥品也提前20分鐘拿出來緩和一下。新潔爾滅（0.1％）泡紗布（用10ml5％的新潔爾滅加水至500ml即得），消毒地面（1：500的84液），用酒精棉球擦拭臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風(fēng)機吹至實驗結(jié)束。

具體方法為：

1、把兩個5ml注射器分別插入DMEM和胰酶中，分別向兩個圓皿中加入5ml的DMEM培養(yǎng)液。用一把大鑷子從鼠盆里取出一只生后2~3天的SD大鼠，放入0.1％新潔爾滅浸泡一下后拿出放在泡沫板上，用針頭把鼠固定（位置擺正），用另一把大鑷子取碘酒棉球擦皮膚，再用酒精棉球脫碘，取一把小剪子及小鑷子開皮，充分撕拉開，再用酒精棉球消毒，后換另一把小剪子和鑷子在劍突處正中線稍偏左開胸取心。

2、取出的心放在剛才準備的一個裝有DMEM的圓皿中再取下一只。重復(fù)以上過程。（鼠全部殺死后，把取鼠鑷及泡沫板、新潔爾滅缸等拿出臺面。消毒、清潔，鋪紗布、換手套。

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