細胞計數和臺盼藍染色

血球計數板每一大方格長為1mm ，寬為1mm ，高為0.1mm ，體積為0.1mm3 ，可容納的溶液是0.1?l ，那么每ml 溶液中所含細胞數即是視野中每一大方格中數出的細胞數的10000 倍。

實驗步驟

（一）準備計數板：用酒精清潔計數板和蓋玻片，然后用吸水紙輕輕擦干。

（二）制備細胞懸液：用胰蛋白酶消化單層培養細胞或收集懸浮培養細胞，制成單個細胞懸液。要求細胞密度不低于104 /ml ，若細胞數很少，應將懸液離心（1000rpm ，2min ），重懸浮于少量培養液中。

（三）加樣：將蓋玻片蓋在計數板兩槽中間。用吸管輕輕吹打細胞懸液，吸取少量細胞懸液，在計數板上蓋玻片一側加細胞懸液，加樣量不要溢出蓋玻片，也不要過少或帶氣泡。否則要將計數板和蓋玻片擦干凈重新加樣。

（四）計數：在顯微鏡下，用10 ×物鏡觀察計數板四角大方格中的細胞數，細胞壓中線時，只計左側和上方者，不計右側和下方者。

（五）計算：將計算結果代入下式，得出細胞密度。

細胞數/ 毫升原液= （4 大格細胞數之和/4 ）×104 ×稀釋倍數

注意事項

（一）消化單層細胞時，務求細胞分散良好，制成單個細胞懸液，否則會影響細胞計數結果。

（二）取樣計數前，應充分混勻細胞懸液。在連續取樣計數時，特別應該注意這一點，否則前后計數結果會有很大誤差。

（三）鏡下計數時，遇到2 個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算。如細胞團占10% 以上，說明消化不充分；或細胞數少于200 個/10mm2 或多于500 個/10mm2 時，說明稀釋不當，需重制備細胞懸液、計數。

培養細胞活力的檢測

臺盼藍排斥實驗

1.制備單個細胞懸液，適當稀釋；

2.向細胞懸液中加入0.4% 臺盼藍溶液，使臺盼藍終濃度為0.04% ；

3 ．在三分鐘內用血球計數板分別計數活細胞和死細胞，死細胞被染成淡藍色。

注意事項：在三分鐘內完成死細胞計數，否則部分活細胞也會被染色，影響實驗的準確性。

北京天優?？瞪锟萍加邢薰?/span>

官網：http://m.jyzjsd.com/

服務熱線：400-860-6160 

聯系電話/微信：13718308763  

QQ:2136615612      3317607072

E-mail：Tianyoubzwz@163.com