細(xì)胞固定、染色原理與方法
一、固定與固定液
固定：將新鮮的活組織從生物體取下后，立即投入固定劑中，借助化學(xué)藥品的作用，使細(xì)胞保持原有形態(tài)、結(jié)構(gòu)的一種手段。
1. 目的
（1）迅速防止細(xì)胞死亡后的變化,防止自溶、腐敗，盡量保持生長(zhǎng)狀態(tài)結(jié)構(gòu)。
（2）使細(xì)胞中的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持生前的形態(tài)。
（3）使組織內(nèi)各種物質(zhì)成分產(chǎn)生不同的折光率，便于觀察和鑒定。
（4）使不同組織成分對(duì)染料有不同的親和力，便于染色。
（5）防止細(xì)胞過度收縮或膨脹，失去原有的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
2. 時(shí)期
（1）有絲分裂：有絲分裂主要發(fā)生在根尖、莖生長(zhǎng)點(diǎn)及幼葉等部位的分生組織，根尖取材容易，操作和鑒定方便。
（2）減數(shù)分裂：選取適當(dāng)大小的花蕾是觀察花粉母細(xì)胞減數(shù)分裂的關(guān)鍵性的第一步。此時(shí)的植株形態(tài)及花蕾大小依植物的類別及品種有所不同。
小麥：在植株開始挑旗，旗葉與下一葉的葉耳間距為3-4 cm，花藥長(zhǎng)度大致在1-2 mm左右，黃綠色時(shí)取材最好。如花藥為綠色時(shí)則為時(shí)過早，花藥為黃色，則已過時(shí)。一般上午8-10點(diǎn)為取材最佳時(shí)間。
玉米：一般夏玉米在7月份取材，以上午7-8點(diǎn)為好。在玉米雌穗未抽出前的7-10天手摸植株上部(喇叭口下部)有松軟感覺，表明雄花序即將抽出。用刀在頂葉近喇叭口處縱向劃一刀，切口長(zhǎng)10-15 cm，剝出雄花序，頂端花藥長(zhǎng)3-5 mm，花藥尚未變黃時(shí)取材。
蠶豆：從現(xiàn)蕾開始，上午10-11點(diǎn)可選取2-3 mm大小的花蕾或一小段花序。蠶豆開花的次序是由下而上，由外而內(nèi)。
3. 固定時(shí)的注意事項(xiàng)
（1）固定液量：20倍于材料的體積，以免固定液被稀釋。
（2）選擇合適的固定液：滲透力強(qiáng)的固定液既可以迅速進(jìn)入組織中，又不使組織過度收縮或膨脹。
（3）固定的時(shí)間要合適：
與材料的大小和溫度有關(guān)：材料大則時(shí)間長(zhǎng)，材料小則時(shí)間短；溫度高則時(shí)間短，溫度低則時(shí)間長(zhǎng)。
經(jīng)固定的材料如不及時(shí)使用，可以經(jīng)過90%酒精換到70%酒精中各半小時(shí)，再換入一次70%酒精，在0-4 ℃冰箱內(nèi)可保存半年。經(jīng)過較長(zhǎng)時(shí)間保存的材料進(jìn)行觀察前可以換新的固定液再處理一次，效果較好。
固定液：固定液包括簡(jiǎn)單固定液和混合固定液兩種。簡(jiǎn)單固定液就是用一種藥品作為固定液，如乙醇、甲醛、冰醋酸、升汞等。簡(jiǎn)單固定液只對(duì)細(xì)胞的某種成分固定效果較好，而不能將所有的成分都保存下來。混合固定液是指兩種或兩種以上的化學(xué)物質(zhì)的混合液，如卡諾氏固定液等。
1. 固定液的條件
（1）迅速滲入組織,殺死原生質(zhì)。在殺死的短時(shí)期中,細(xì)胞形態(tài)不致有所變化。
（2）必須具有滲透力，對(duì)組織各部分的滲透力相等，可使組織內(nèi)外完全固定。
（3）盡可能避免使組織膨脹或收縮。
（4）使細(xì)胞內(nèi)的成分凝固或沉淀。
（5）增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光程度，易于鑒別。
（6）增加媒染作用和染色能力。
（7）使組織變硬，具有一定的硬度。
（8）固定以后能起到保存的作用。
（9）在凝固原生質(zhì)以后，增加細(xì)胞對(duì)于各種穿透的抵抗力，不致于因以后的處理而使固定的原生質(zhì)變形。
2. 常用的幾種固定液
（1）酒精：有固定、硬化和脫水的作用。可以固定白蛋白、球蛋白、核蛋白，但對(duì)核蛋白固定效果較差(親和力小且易自溶)。酒精固定的特點(diǎn)是殺死快，滲透力強(qiáng)，對(duì)組織收縮較大(可收縮20%左右)，可使材料變硬。酒精常用于混合固定液中，但由于它本身是一種還原劑，很容易氧化成乙醛，甚至氧化成醋酸，因此最好不與三氧化鉻、重鉻酸鉀及鋨酸等氧化劑配合使用。但與甲醛、醋酸或丙酸配合，用作固定效果很好。酒精能溶解脂肪及凝脂，故不宜用來固定脂類材料。
（2）甲醛水溶液：甲醛在水中的溶解度為37-40%，滲透力強(qiáng)，固定均勻，對(duì)組織收縮作用小，一般用于固定大材料。市售溶液中含量下降，因形成三聚甲醛而失效。
（3）冰醋酸：純醋酸在溫度稍變低時(shí)即形成冰晶，所以又稱為冰醋酸。常用0.3-0.5%的濃度作為固定液。冰醋酸對(duì)材料有膨脹作用，對(duì)核蛋白固定好，可與水、酒精、氯仿混合。
（4）AF液：90 ml乙醇+10 ml甲醛 用于固定大塊組織。
（5）卡諾氏固定液： 冰醋酸:氯仿:無水乙醇=1:3:6
改良卡諾氏固定液: 冰醋酸:無水乙醇=1:3
二、染色與染色原理
根據(jù)染料的來源不同可分為天然染料(蘇木精、洋紅等)和人工合成染料（煤焦油染料，如堿性品紅等）。
1. 苯與苯的取代物
苯醌(紅色) 苯酚 三硝基苯
2. 染料的分子結(jié)構(gòu)
呈酸或堿性，溶于水，可電離，可與材料結(jié)合.
北京天優(yōu)福康生物科技有限公司
官網(wǎng)：http://m.jyzjsd.com/
服務(wù)熱線：400-860-6160
聯(lián)系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
