線粒體的超活染色與觀察

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br style="box-sizing: border-box;"/>1. 觀察動、植物活細(xì)胞內(nèi)線粒體 的形態(tài)、數(shù)量與分布。
2. 學(xué)習(xí)一些細(xì)胞器 的超活染色技術(shù)。

二、實(shí)驗(yàn)原理
活體染色是指對生活有機(jī)體的細(xì)胞或組織某些結(jié)構(gòu)能著色但又不影響細(xì)胞的生命活動和產(chǎn)生任何物理化學(xué)變化以致引起細(xì)胞的死亡的一種染色方法。因此活染技術(shù)通常可用來研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理、病理狀態(tài)。根據(jù)所用染色劑的性質(zhì)和染色方法的不同，通常把活體染色分為體內(nèi)活染與體外活染兩類。體內(nèi)活染是以膠體狀的染料溶液注入動、植物 體內(nèi)，染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里，達(dá)到易于識別的目的。體外活染又稱超活染色，它是由活的動、植物分離出部分細(xì)胞或組織小塊，以染料溶液浸染，染料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色。詹納斯綠B 是毒性較小的堿性染料，可專一性地對線粒體進(jìn)行超活染色，這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài))，呈藍(lán)綠色；而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中，這些染料被還原為無色的色基(即無色狀態(tài))。

三、實(shí)驗(yàn)用品
（一）材料 肝細(xì)胞、人口腔上皮細(xì)胞、洋蔥鱗莖內(nèi)表皮細(xì)胞
（二）器材 顯微鏡、恒溫水浴鍋、解剖盤、剪刀、表面皿、吸管、牙簽、吸水紙。
（三）試劑
1．Ringer 溶液
氯化鈉 0.85g
氯化鉀 0.25g
氯化鈣 0.03g
蒸餾水 100ml
2. 1%詹納斯綠B 溶液（原液）
稱取50mg 詹納斯綠B 溶于5ml Ringer，稍加微熱(30～40℃)，使之溶解，用濾紙過濾后，即為1%原液。

四、實(shí)驗(yàn)操作
1. 人口腔粘膜上皮細(xì)胞線粒體的超活染色觀察
(1) 取清潔載玻片放在37℃恒溫水浴鍋的金屬板上，滴2 滴詹納斯綠B 應(yīng)用染液。
(2) 實(shí)驗(yàn)者用牙簽寬頭在自己口腔粘膜處稍用力刮取上皮細(xì)胞，將刮下的粘液狀物放入載玻片的染液滴中，染色10～15min(注意不可使染液干燥，必要時(shí)可再加滴染液)，蓋上蓋玻片，用吸水紙吸去四周溢出的染液，置顯微鏡下觀察。
(3) 在低倍鏡下，選擇平展的口腔上皮細(xì)胞，換高倍鏡或油鏡進(jìn)行觀察。可見扁平狀上皮細(xì)胞的核周圍胞質(zhì)中，分布著一些被染或藍(lán)綠色的顆粒狀或短棒狀的結(jié)構(gòu)，即是線粒體。
2. 小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色觀察
(1) 用脊椎脫臼法處死小白鼠，置于解剖盤中，剪開腹腔，取小白鼠肝邊緣較薄的肝組織塊，放入表面皿內(nèi)。用吸管吸取Ringer 液，反復(fù)浸泡沖洗肝臟，洗去血液。
(2) 在干凈的凹面載玻片的凹穴中, 滴加詹納綠B 應(yīng)用液，再將肝組織塊移入染液，注意不可將組織塊完全淹沒，要使組織塊上面部分半露在染液外，這樣細(xì)胞內(nèi)的線粒體表面可充分得到氧化，易被染色。當(dāng)組織塊邊緣被染成藍(lán)綠色即成(—般需染20～30min)。
(3) 吸去染液，滴加Ringer 溶液，用眼科剪將組織塊著色部分剪碎，使細(xì)胞或細(xì)胞群散出。然后，用吸管吸取分離出的細(xì)胞懸液，滴一滴子載玻片上，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。
(4) 在低倍鏡下選擇不重疊的肝細(xì)胞，在高倍鏡或油鏡下觀察，可見具有l(wèi)～2 個(gè)核的肝細(xì)胞質(zhì)中，有許多被染成藍(lán)綠色的線粒體，注意其形態(tài)和分布狀況。
3. 洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞線粒中的超活染色觀察
(1) 用吸管吸取詹納斯綠B 應(yīng)用染液，滴一滴于干凈的載破片上，然后撕取一小片洋蔥鱗莖內(nèi)表皮，置于染液中，染色10～15min。
(2) 用吸管吸去染液，加—滴Ringer 液，注意使內(nèi)表皮組織展平，蓋上蓋玻片進(jìn)行觀察。
(3) 在高倍鏡下，可見洋蔥表皮細(xì)胞中央被一大液泡所占據(jù)、細(xì)胞核被擠至—側(cè)細(xì)胞壁處。細(xì)觀察細(xì)胞質(zhì)中線粒體的形態(tài)與分布。