小鼠骨髓來源巨噬細胞分離培養

簡介

巨噬細胞是目前免疫學研究中的熱點細胞，它作為固有免疫的關鍵成分，在維持機體的穩態，疾病的預防和治療等方面發揮至關重要的作用。這里以骨髓來源的巨噬細胞為例，以更加專業簡潔的分離培養方法，為更好地研究巨噬細胞的生物學功能打下基礎。

材料與儀器

【試劑】1640 培養基、75% 酒精、9% 生理鹽水、多聚賴氨酸包被液、紅細胞裂解液、巨噬細胞集落刺激因子；

【耗材】無菌剪刀、無菌鑷子、70 μm 細胞過濾器、細胞培養板；

步驟

（1）提前采用多聚賴氨酸包被實驗所需細胞培養板；

（2）小鼠頸椎脫臼處死，然后放入 75% 酒精中浸泡 3-5 min 后，將小鼠轉移到超凈臺上一個含有 PBS 皿上；迅速分離股骨和脛骨，盡可能多的去除附著的肌肉組織；

（3）9% 的生理鹽水浸泡股骨和脛骨，剪去兩端，暴露骨髓腔；

（4）生理鹽水沖洗骨髓腔，70 μm 細胞過濾器過濾骨髓沖洗液；

（5）離心，室溫 1200 rpm，5 min；

（6）棄掉上清，向離心管中加入紅細胞裂解液（ACK Lysis Buffer），用槍頭反復吹打沉淀，使紅細胞充分懸浮，紅細胞裂解，在冰上靜置 2 min，加入 1640 培養基，在室溫 1000 rpm 離心 5 min 條件下離心，后棄掉上清；

（7）用含有 10 ng/mL 的巨噬細胞集落刺激因子的 1640 完全培養基重懸細胞沉淀，接種于 12 孔細胞培養板中；

（8）每隔兩天換液一次，仍用含有巨噬細胞集落刺激因子的 1640 完全培養基；

（9）以此方法，培養直至第六天，細胞分化為成熟的巨噬細胞，可用于后續實驗操作。

注意事項

（1）實驗前所有器械消毒，高壓滅菌，液體無菌過濾；

（2）生理鹽水沖洗骨髓腔時，要沖至骨髓腔發白；

（3）用于后續培養需保證全稱無菌操作；

（4）1640 完全培養基中加入巨噬細胞集落刺激因子，定向誘導分化。