肝細胞原代培養

材料：

小鼠

器具：

飯盒、紗布、小剪子、小鑷子、大鑷子、大燒杯、平皿、研磨玻片、濾網、離心管（15/50ml）、6孔培養板、吸管、移液管、手套、微量加樣器

試劑：

DMEM（含血清）、無血清DMEM培養基、胰酶、PBS

準備：

酒精擦拭臺面后把物品擺放好，開紫外線燈照30分鐘后開鼓風機吹至實驗結束。

操作步驟：

1、將小鼠斷頸致死，置75%酒精泡2-3秒鐘，取肝臟，置于盛有PBS的平皿中。

2、剔除脂肪、結締組織、血液等雜物,轉移到另一個盛有PBS液的平皿中。

3、用手術剪將臟器剪成小塊（1mm2），玻片研磨，轉到離心管，離心1000rpm，5min。

4、視組織或細胞量加入5-6倍（3-5ml）胰酶，37℃中消化20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，或用吸管吹打一次，使細胞分離。

5、加入3-5ml含血清的培養液以終止胰酶消化作用。

6、用100目孔徑濾網濾過，除去未消化的大組織塊。

7、1000rpm，離心5分鐘，棄上清液。

8、加入無血清培養液5ml，沖散細胞，再離心一次，棄上清液。

9、加入含血清的培養液l-2 ml（視細胞量），血球計數板計數。

10、將細胞調整到5×105/ml左右，轉移至6孔培養板中，37℃下培養。

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