原代培養人前脂肪細胞

材料與試劑：

鑷子、剪子、培養皿

離心管、培養瓶、吸管、滴管

200目篩網

膠原酶（10ml）（20mg膠原酶、200mg牛血清白蛋白、10毫升雙蒸水）國外也用培養基配.

方法：

1、取無菌條件下新鮮切除的人腹部皮下脂肪組織約5－10克，放入培養皿，用1×PBS沖洗2－3次，充分洗去血污，剔除結締組織和可見血管。

2、充分剪碎脂肪組織為1mm×1mm的小塊。

3、將其加入到含有5毫升膠原酶的離心管里，37度水浴振蕩消化1小時。

4、將含有組織的消化液加入到有10毫升DMEM/F12培養基的離心管中，并且使用吸管反復吹打使組織塊分散，然后通過孔徑25μM（200目）的篩網過濾，收集濾液和未過濾的組織塊。

5、將濾液以600g離心5分鐘棄上清，加入原代培養的基礎培養基制成細胞懸液。

6、將未濾過的組織按照上述過程再處理一次，將倆次獲得的細胞懸液混勻計數，按照104個/cm2的密度接種于培養瓶里，于37度，5％CO2培養箱中培養。

接種12－16小時基本貼壁。在增殖狀態下的前脂肪細胞可以使用胰蛋白酶消化的方法傳代，并且可以凍存和復蘇。

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