新生大鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞的原代培養(yǎng)

將出生2天以內(nèi)的新生SD大白鼠10只，用75%的酒精浸泡消毒后，采用無菌方法迅速取出大腦，用冷的D-Hanks液清洗并剔除腦膜和血管，取大腦皮質(zhì)，將組織剪碎為1mm3，用0.125%胰蛋白酶,37oC消化10分鐘，過濾（200目尼龍濾網(wǎng)），離心（1000rpm 10分鐘）。

去上清，加入DMEM/F12完全培養(yǎng)基（其中含10%胎牛血清，10%馬血清，L-谷氨酰胺2mmol/L，青霉素100u/ml,鏈霉素100μg/ml）制成細胞懸液。

計數(shù)后按5×105/cm2接種于培養(yǎng)瓶。貼附30min后，轉(zhuǎn)移細胞懸液至新瓶中，加入DMEM/F12完全培養(yǎng)基，在37oC, 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)9天（每3天更換培養(yǎng)液一次），第9天將培養(yǎng)瓶置于恒溫旋轉(zhuǎn)搖床上37oC, 240rpm，搖18小時，去掉懸浮的細胞，用D-Hanks液清洗3次，進行傳代培養(yǎng)即得純化的星形膠質(zhì)細胞。

經(jīng)免疫細胞化學法檢測，98%以上的細胞GFAP免疫反應為陽性。

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