按細(xì)胞比重分離B細(xì)胞

按細(xì)胞比重分離B細(xì)胞

1.將2～3ml含3×107純化的B細(xì)胞（B細(xì)胞>90％）的細(xì)胞懸液加到3ml Percoll溶液（比重1.074）上，水平離心1000×g 20分鐘。

2.吸去無細(xì)胞上清液，交界面的低密度B細(xì)胞和大部分Percoll溶液。由于此時(shí)細(xì)胞沉淀非常松散，需留下約0.2ml Percoll溶液以防吸去了沉淀細(xì)胞。輕敲離心管，用留下的液體懸浮高密度B細(xì)胞。

3.用洗滌液分別洗滌低密度B細(xì)胞和高密度B細(xì)胞兩次，每次離心500×g 10分鐘。最后，測定細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞活力，用1～2ml含5％小牛血清的洗滌液將細(xì)胞配成適當(dāng)濃度。

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