人或動物腦毛細(xì)血管原代內(nèi)皮細(xì)胞的分離

實驗材料：

1. 人或動物的腦部毛細(xì)血管

2. PBS，含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml

3. 10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶

4. 250g/L BSA

5. 眼科剪，眼科鑷

6. 60μm尼龍篩、150μm尼龍篩和230μm尼龍篩

7. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 麻醉動物后取其腦組織，將腦組織放入盛有PBS的容器內(nèi)，去除腦膜和表面血管，取皮質(zhì)灰質(zhì)，用勻漿機將其制成勻漿。

2. 用10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml膠原酶溶液，37℃，消化腦組織1h。吸去上清，將沉淀懸浮于250g/L BSA的PBS中，4000r/min離心10min，去除懸浮的脂肪細(xì)胞碎片和髓磷脂。

3. 將沉淀物重新懸浮于上述消化液中，37℃消化1-3h。消化產(chǎn)物先過230μm尼龍篩，再過150μm尼龍篩，以去除大血管、細(xì)胞碎片等。

4. 收集微血管。將濾過液通過60μm尼龍篩，以便收集微血管內(nèi)皮細(xì)胞。將篩子倒轉(zhuǎn)，用培養(yǎng)液將微血管內(nèi)皮細(xì)胞沖洗至平皿中。

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