正常人骨間充質干細胞的培養

實驗材料：

1. 骨髓來源：骨髓材料由健康人提供；

2. 清洗液：不含Ca²⁺ 和Mg²⁺ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；

3. 分離液：密度為1.073g/ml的Percoll溶液；

4. DMEM-LG培養液：含1000mg/L葡萄糖的DMEM培養液，補充10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml；

5. 消化液：為0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液；

實驗方法：

1. 由臨床醫生抽取健康人骨髓。加肝素抗凝；

2. 取25ml肝素化骨髓與等體積的PBS混合，用吸管吹打分散細胞。在室溫下離心（900g，10min）。棄上清液；

3. 加入PBS懸浮細胞，調節細胞密度至4×10⁷ 個/ml；

4. 在離心管中先加入1.073g/ml的Percoll溶液，再將5ml細胞懸液鋪于其上。離心（900g，30min）；

5. 收集界面上的細胞，加入DMEM-LG培養液清洗。離心，收集細胞；

6. 用DMEM-LG培養液重新懸浮細胞，計數細胞，調節細胞密度；

7. 將細胞以1.6×10⁵ 個/cm² 的密度接種于培養瓶中。在37℃、5%CO₂ 飽和濕度的CO₂  培養箱中培養。48h后換液，以后每3—4d換液1次；

8. 當培養的細胞相互匯合達到90%的生長表面時，用0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA液消化分散細胞。進行繼代培養。

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