大規(guī)模培養(yǎng)常用方法

根據(jù)動物細(xì)胞的類型，可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進(jìn)行大規(guī)模培養(yǎng)。 

一、動物細(xì)胞生長特性及培養(yǎng)溫度 
      1.細(xì)胞生長緩慢，易污染，培養(yǎng)需用抗生素 
      2.細(xì)胞大，無細(xì)胞壁，機(jī)械強(qiáng)度低，環(huán)境適應(yīng)性差 
      3.需氧少，不耐受強(qiáng)力通風(fēng)與攪拌 
      4.群體生長效應(yīng)，貼壁生長（錨地依賴性） 
      5.培養(yǎng)過程產(chǎn)品分布細(xì)胞內(nèi)外，成本高 
      6.原代培養(yǎng)細(xì)胞一般繁殖50代即退化死亡 

依據(jù)在體外培養(yǎng)時對生長基質(zhì)依賴性差異，動物細(xì)胞可分為兩類：
      貼壁依賴型細(xì)胞：需要附著于帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長，大多數(shù)動物細(xì)胞，包括非淋巴組織細(xì)胞和許多異倍體細(xì)胞均屬于這一類。 
      非貼壁依賴型細(xì)胞：無需附著于固相表面即可生長，包括血液、淋巴組織細(xì)胞、許多腫瘤細(xì)胞及某些轉(zhuǎn)化細(xì)胞。 

培養(yǎng)細(xì)胞的最適溫度相當(dāng)于各種細(xì)胞或組織取材機(jī)體的正常溫度。人和哺乳動物細(xì)胞培養(yǎng)的最適溫度為35~37℃。偏離這一溫度，細(xì)胞正常的代謝和生長將會受到影響，甚至死亡。總的來說，培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐力比高溫高。溫度不超過39℃時，細(xì)胞代謝強(qiáng)度與溫度成正比；細(xì)胞培養(yǎng)置于39~40℃環(huán)境中1h，即受到一定損傷，但仍能恢復(fù)；當(dāng)溫度達(dá)43℃以上時，許多細(xì)胞將死亡。當(dāng)溫度下降到30~20℃時，細(xì)胞代謝降低，因而與培養(yǎng)基之間物質(zhì)交換減少。首先看到的是細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變以及細(xì)胞從基質(zhì)上脫落下來。當(dāng)培養(yǎng)物恢復(fù)到初始的培養(yǎng)溫度時，它們原有的形態(tài)和代謝也隨之恢復(fù)到原有水平。 

二、貼壁培養(yǎng)（attachment culture）是指細(xì)胞貼附在一定的固相表面進(jìn)行的培養(yǎng)。 

1.生長特性：貼壁依賴型細(xì)胞在培養(yǎng)時要貼附于培養(yǎng)（瓶）器皿壁上，細(xì)胞一經(jīng)貼壁就迅速鋪展，然后開始有絲分裂，并很快進(jìn)入對數(shù)生長期。一般數(shù)天后就鋪滿培養(yǎng)表面，并形成致密的細(xì)胞單層。 

2.貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)： 
      容易更換培養(yǎng)液；細(xì)胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養(yǎng)液，清洗后直接加入新培養(yǎng)液。 
      容易采用灌注培養(yǎng)，從而達(dá)到提高細(xì)胞密度的目的；因細(xì)胞固定表面，不需過濾系統(tǒng)。 
      當(dāng)細(xì)胞貼壁于生長基質(zhì)時，很多細(xì)胞將更有效的表達(dá)一種產(chǎn)品。 
      同一設(shè)備可采用不同的培養(yǎng)液/細(xì)胞的比例。 
      適用于所有類型細(xì)胞。 

3.貼壁培養(yǎng)的缺點(diǎn)：與懸浮培養(yǎng)法相比 
      擴(kuò)大培養(yǎng)比較困難，投資大； 
      占地面積大； 
      不能有效監(jiān)測細(xì)胞的生長； 

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