CHO細胞的傳代、培養方法
細胞復蘇后,在顯微鏡下觀察大約有80%~100%的細胞已經貼壁時用新鮮的培養基換掉原來的培養基,去除DMSO對細胞的毒害,估計復蘇到換液的時間為0.5~1.5h。
2~3d細胞長滿后傳代,傳代前先把培養基和0。2%的胰酶從冷庫放到室溫1~2H,由于冷庫中的培養基溫度與在溫房的溫差很大,這樣做可以防止細胞"感冒"。
然后把培養瓶中的廢液倒掉,加入約5~10ml胰酶,把培養瓶平放使胰酶能夠浸潤到瓶子的表面,放到瓶架上,把瓶架轉速調到平常運轉的倍,大約1MIN后再把胰酶倒掉,一部分很少即可,拍打瓶子,看見細胞象針眼一樣融融的下滑加入培養基就可以了,如果有部分還難以消化下來,使勁搖晃瓶子也能使其掉下。
加入培養基后搖晃瓶子使細胞全部懸浮到培養基中,然后把培養基等份分到其他的培養瓶中,細胞密度大小決定所傳瓶數,一般一傳四即可。把瓶架調到合適的轉速,放到溫房繼續培養,3天后再行傳代,如此反復進行。
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