HPLC蒸發(fā)光散射檢測器的原理

簡介

蒸發(fā)光散射檢測器（Evaporative Light Scattering Detector）設(shè)計用于高效液相色譜系統(tǒng)，分析任何揮發(fā)性低于流動相的化合物。ELSD的應(yīng)用范圍包括：碳水化合物，藥物，脂類，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化劑，營養(yǎng)滋補品，及組合分子庫等。

蒸發(fā)光散射檢測器消除了常見于其他HPLC檢測器的問題。示差檢測受溶劑前沿峰的干擾使得分析復(fù)雜化，并且由于對溫度極其敏感使得基線很不穩(wěn)定，與梯度洗脫不相容。另外，示差檢測器的響應(yīng)不如ELSD靈敏。而低波長紫外檢測器在急變梯度條件下受基線漂移的困擾，并要求被分析化合物帶有發(fā)色團。ELSD則不受這些限制。不同于這些檢測器，ELSD能在多溶劑梯度的情況下獲得穩(wěn)定的基線，使得分辨率更好、分離速度更快。另外，因為ELSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性，所以ELSD檢測時樣品不要求帶有發(fā)色團或熒光基團。

操作原理

蒸發(fā)光散射檢測器的獨特檢測原理為，首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測。

步驟1：霧化

霧化

經(jīng)HPLC分離的柱洗脫液進入霧化器，在此與穩(wěn)定的霧化氣體（一般為氮氣）混合形成氣溶膠。氣溶膠由均勻分布的液滴組成，液滴大小取決于分析中采用的氣體流量。氣體流量越低形成的液滴越大，液滴越大則散射的光越多，從而提高了分析靈敏度，但是越大的液滴在漂移管中越難蒸發(fā)。每種方法均存在產(chǎn)生最佳信號噪音比率的最優(yōu)化氣體流量。流動相流速越低要求適當(dāng)霧化的氣體流量也越低。用內(nèi)徑為2.1mm的微徑柱代替內(nèi)徑為4.6mm標(biāo)準(zhǔn)型分析柱，能大大降低流動相流速，因而提高分析的靈敏度。

步驟2：蒸發(fā)

蒸發(fā)

氣溶膠中揮發(fā)性成分在加熱的不銹鋼漂移管中蒸發(fā)。為特定應(yīng)用設(shè)置適當(dāng)?shù)钠乒軠囟龋Q于流動相組成和流速，以及樣品的揮發(fā)性。高有機含量流動相比高含水量流動相要求蒸發(fā)的漂移管溫度低。流動相流速越低比流動相流速越高要求蒸發(fā)的漂移管溫度越低。半揮發(fā)性樣品要求采用較低的漂移管溫度，以獲得最佳靈敏度。最佳溫度需要通過觀察各溫度時的信號噪音比率來確定。

步驟3：檢測

檢測

懸浮于流動相蒸汽中的樣品顆粒從漂移管進入到光散射檢測池。在檢測池中，樣品顆粒散射激光光源發(fā)出的光而蒸發(fā)的流動相不散射。散射光被硅光電二極管檢測，產(chǎn)生電信號輸送模擬信號輸出端口，被用于模擬輸出的數(shù)據(jù)采集。

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