SPE-HPLC-MS/MS法

材料與儀器

牛肝臟 牛肌肉
乙腈 正己烷 氮氣 三乙胺
離心 C8SPE柱 針筒濾膜 色譜柱

步驟

1.  提取與凈化
稱取勻漿的牛肝臟或肌肉2.5 g，置于50 mL離心管中，加入8 mL乙腈，潤動0.5 min， 2500 r/min離心5 min，取上清液。殘留組織用8 mL乙腈重復提取一次，合并兩次的上清液于500 mL的離心管中，加30 mL純水-三乙 胺（30 + 0.045），過C8SPE柱（500 mg，3 mL），用 20 mL乙腈-水-三乙胺（40 + 60 + 0.1）淋洗，吹干；再用3 mL正己烷淋洗，吹干；用2 mL乙腈洗脫，收集。取4 mL純水和6uL三乙胺加至乙腈洗脫液中。過C8SPE柱（500 mg，10 mL），用10 mL乙腈-水-三乙胺（30 + 70 + 0.1）淋洗，吹干，再用8 mL正己烷淋洗，吹干； 最后用2 mL乙腈洗脫，吹干，收集洗脫液于5 mL刻度試管內，50 ℃氮氣吹干，用0.5 mL乙腈定容，過0.45 um針筒濾膜，進HPLC-MS/MS分析。
2.  液譜-質譜串聯條件
色譜儀：Waters 2690；
流動相：乙腈-水-甲酸（95 + 5 + 0.1）；
流速：0.2 mL/min；
色譜柱：C18 柱，150 mm，2.1 mm，3 um；柱溫：（20 ± 2）℃；
進樣量：1O0L；
質譜儀：電噴霧源（ESI）；
毛細管電壓：3.2 kV；
錐孔電壓：70 V；
源溫：120 ℃ ；
霧化氣：300 ℃ ；
倍增電壓：650 V；
碰撞氣：氬氣。