乳腺組織培養實驗

原理

乳腺主要由腺上皮組成，培養成功時可獲純上皮細胞培養物。乳腺材料易于獲得，既可培養正常乳腺，也可利用乳腺癌組織。乳腺組織不難培養，是很好的培養和研究對象。

材料與儀器

乳腺
Hanks 培養液
吸管 紗布

步驟

一、取材

培養正常乳腺可從乳腺切除組織或乳腺成形術組織取材。預先把無菌容器送交手術室（最好含有培養液），委托術者選脂肪少、腺組織多的部位，切取少許，送培養室立即進行培養。獲取組織后，應先剝除脂肪組織；培養正常乳腺組織宜用膠原酶消化法。培養乳腺癌組織可采用兩種方法。

二、培養程序

1.  直接培養法

適于培養含纖維少的軟組織，其主要過程是

（1）在含有少量培養液或Hanks液的容器中，用鋒利刀片將組織反復切割成碎塊（或用剪刀剪切）。

（2）把組織碎塊連同液體注入離心管中，再補加少許培養液，用吸管吹打片刻，置試管架中3~5 分鐘。

（3）此時乳腺細胞團或單個細胞大多沉降至管底，而脂肪或其它含纖維多的碎塊懸于液體上部；吸除上層液可排除非腺細胞成分，如此可重復2～3 次。

（4）末次處理結束后，向沉降管中再補加培養液，用吸管稍吹打，使沉降物重懸。

（5）不待細胞團塊下降立即通過3～4 層無菌沙布濾入另管中。調整好適宜密度，接種入培養瓶中培養。

2.  膠原酶消化法

適于處理含纖維多的較硬組織，其過程與培養其它組織相同。

常見問題

一、討論
1.  上皮細胞和間充質關系密切，已證明上皮細胞生長和分化因子來源于間充質。

在體內，上皮細胞生長在由膠原組成的基膜上，基膜含有膠原蛋白、附著蛋白和氨基多糖；在體外培養時，上皮細胞和間充質依存關系仍然存在。

上皮細胞生長在膠原上比生長在其它底物上效果更好。正常上皮細胞與其它組織相互依賴性大，較難培養。

考慮到這些特點和采取相應措施，有助于提高培養成功率。

2.  在初代培養成功后，為進一步獲取乳腺細胞培養的成功，主要需解決刺激乳腺細胞持續生長問題。

只有旺盛的細胞生長，才能壓制成纖維細胞，獲得純上皮細胞培養物。

其次是生長后的乳腺上皮細胞對底物（特別是塑料底物）附著甚牢不易解離，不利于制成細胞懸液進行傳代。

為克服這些障礙，當前多采用以下一些措施：在接種底物上鋪以膠原層較好，既利乳腺細胞生長，也易使細胞分離。

有人還證明培養在膠原上的乳腺細胞比生長在塑料底物上的同樣細胞對固醇類激素更易發生反應。

此外，也可在膠原層上再接種飼細胞，對壓制成纖維細胞和促乳腺上皮細胞生長也有作用。

其次為選用適宜的培養條件，是乳腺上皮細胞培養的另一重要因素。

使用無血清培養基MCDB202 再補加牛垂體浸出物效果甚好。或用更加完善的無血清培養基MCDBl70，再加上皮細胞生長因子（EGF）、胰島素、氫化可的松、豬促乳素和前列腺素E1 等，不論對正常乳腺上皮細胞或乳腺癌細胞，都有極好的促生長效應。

在不能得到像MCDB 這種培養基的情況下，—般使用Eagle 或1640 等培養基和小牛血清，再補加胰島素、氫化可的松等，都利于乳腺上皮細胞生長。