肝細胞培養實驗

原理

肝實質由大量肝細胞和少量間質組成，人胎兒、成人和動物的肝臟皆可用于培養；肝臟具有取材方便和易于生長的優點，能獲得典型上皮細胞培養。肝細胞形態規整，有多種功能并具有代謝活化致癌物的能力，適用做多種研究；我國已建有多個人肝癌細胞系。

材料與儀器

肝臟
BSS 消化液 胰蛋白酶 膠原酶
注射器 離心管 培養基

步驟

一、初代組織塊培養

肝組織做組織塊培養效果很好。取新鮮肝臟，先剝除被膜和血管等纖維成分，用刀或剪刀把肝剪成1 mm3左右的小塊，采用貼壁培養法。肝組織易于貼壁，生長力好，一般次日即可出現生長暈。

二、初代消化法培養

1.  把肝組織切成2~4 立方毫米的小塊，用不含鈣鎂的BSS液洗兩次。

2.  移入1：1 的0.1 %胰蛋白酶和0.1 %膠原酶（都用無鈣鎂BSS配制）中，4 ℃冷消化10~12 小時后，通過250 微米和64 微米尼龍網或不銹鋼紗網濾過（用紗布濾過亦可）。

3.  收集細胞、BSS液洗1~2 次、計數、接種培養。
消化培養肝細胞的另一種方法是灌流法：肝臟灌流需用全肝，以較小動物如小鼠和大鼠為好。

1.  無菌解剖動物，取出肝臟，先用BSS洗除血污。

2.  取5 ml注射器一支，吸取消化液后，把注射器頭輕輕插入肝管中，用線繩結扎牢固，以防消化液漏出，輕輕把消化液注入膽管系統，并不時輕柔壓肝臟，以便消化液進入肝小葉中；消化液在肝內停留20~30 分后，在吸出消化液的同時并輕柔壓肝臟，以使肝細胞脫落和消化液吸出。

3.  待吸凈消化液后，注入離心管中，低速離心分離，用RPMI1640培養基培養（較其它培養基為好），能獲得較純的肝上皮細胞和獲較好的效果。
 

三、傳代培養 

待細胞生長連接成片后，用BSS洗一二次，加1：1的0.025 %胰蛋白酶和0.02 %EDTA混合消化3~5 分鐘，待細胞回縮，便停止消化，棄掉消化液、用BSS洗一二次，注入營養液、吹打、制成細胞懸液、再接種培養。