谷物中淀粉含量的測定
簡介
淀粉（starch）是植物的主要貯藏物質(zhì)，大部分貯存于種子、塊根和塊莖中。淀粉 不僅是重要的營養(yǎng)物質(zhì)，并且在工業(yè)上的應(yīng)用也很廣泛。測定谷物中淀粉的含量對于鑒定農(nóng) 產(chǎn)品的品質(zhì)和改進農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)有很大的意義。
原理
谷物中淀粉含量的測定的基本原理是淀粉是由葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱使其水解成葡萄糖, 然后在 濃硫酸的作用下，使單糖脫水生成糠醛類化合物，利用蔥酮試劑與糠醛化合物的顯色反應(yīng)，即 可進行比色測定。
材料與儀器
材料：面粉或其他風干粉碎的樣品
器材：植物樣品粉碎機，離心機，天平，分光光度計，恒溫水浴鍋，分樣篩（100 目），漏斗， 離心管等。
試劑：
①濃 H2SO4（相對密度 1.84）
②蔥酮試劑（同實驗五十二）
③80% 乙醇
④4.6 mol -1 HClO4 溶液和 9. 2 mol - L-1 HClO4 溶液。
步驟
谷物中淀粉含量的測定的基本過程可分為如下幾步：
1. 標準曲線制作：取7支大試管，按表52-1添加試劑，立即搖勻，蓋上蓋子，在沸水浴中 煮沸10 min, 取出冷卻至室溫，用0管調(diào)零，在625 nm波長下比色。以標準葡萄糖含量作橫 坐標，以吸光度值作縱坐標，繪制標準曲線。
表52-1標準曲線制作加樣表
| 試劑 | 試管編號 | ||||||
| 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
| 標準葡萄糖溶液/mL | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
| 蒸榴水/mL | 1.0 | 0.9 | 0.8 | 0.6 | 0.4 | 0.2 | 0 |
| 蔗糖濃度/(ptg?mL'1 ) | 0 | 10 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
| 蔥酮試劑/mL | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 | 5 |
2 . 樣品的提取：稱取 50?100 mg 粉碎過 100 目篩的烘干樣品，置于 15 mL 刻度試管中， 加入 6?7 mL 80% 乙醇，在 80°C 水浴中提取 30 min, 取出離心（3 000 r ? min 1）5 min, 收集 上清液。重復(fù)提取兩次（各 10 min）并同樣離心，收集 3 次上清液合并于燒杯，置于 85°C 恒溫 水浴鍋中，使乙醇蒸發(fā)至 2?3 mL, 攪拌均勻，放入沸水浴中糊化 15 mino 冷卻后，加入 2 mL 冷的 9.2 mol - L-1 HClO4 , 不時攪拌，提取 15 min 后加蒸餡水至 10 mL, 混勻，離心 10 min, 上清液傾入 50 mL 容量瓶。再向沉淀中加入 2 mL 4. 6 mol - L-1 HClO4 溶液，攪拌提取 15 min 后加水至 10 mL, 混勻后離心 10 min, 收集上清液于容量瓶中。然后用水洗沉淀 1?2 次，離心，合并離心液于 50 mL 容量瓶，用蒸餡水定容供測淀粉用。
3. 樣品測定: 取待測樣品提取液 1.0 mL 于試管中，再加蔥酮試劑 5 mL, 快速搖勻，然后 在沸水浴中煮 10 min, 取岀冷卻，在 625 nm 下，用空白調(diào)零測定吸光度值，從標準曲線查出糖 含量（fJLg）。
4 . 結(jié)果計算：
、宀四人曰 丨 C X VTX0.9
淀粉含量? ?「）=
式中一從標準曲線上査得的蔗糖濃度，卩 g - mL1 ； 卩丁一樣品提取液總體積，mL；
峪一顯色時所取樣品液的體積，mL；
m 一樣品重，mg；
0. 9 一由葡萄糖換算為淀粉的系數(shù)。
注意事項
1. 實驗中的顯色液是強酸溶液，使用中注意安全，不要濺到身上和設(shè)備上。
2. 實驗過程中淀粉應(yīng)充分分解為葡萄糖，否則實驗結(jié)果會偏低。
3, 淀粉溶液加熱后，必須迅速冷卻，以防止淀粉老化，形成高度晶化的不溶性淀粉分子 微束。
