載體對溶解性和表達的影響
DNA序列的某些部分，如Shine-Dalgaro盒、啟動子、調控序列、轉錄終止子、復制源等，控制所需基因的翻譯和轉錄。此外，選擇元件被整合到表達載體中以促進質粒在靶細胞中的選擇。包含融合標簽是大腸桿菌表達載體的另一個基本部分。當選擇啟動子框架時，應該考慮下游應用和蛋白質靶類型。當處理潛在有害的蛋白質時，選擇基礎輸出水平較低的啟動子系統是明智的。另一方面，為了盡可能提高蛋白質產量，必須選擇更有效的啟動子。對于易于聚集的蛋白質，可以考慮的一個選擇是使用冷休克啟動子，允許在較低的溫度下表達。來自細菌和其他更大的生物的蛋白質通常折疊更長時間并粘在一起。在大腸桿菌中，折催化劑和蛋白質伴侶可以用來防止蛋白質粘在一起，同時使折尋更容易，兩種蛋白質，一種在靶質粒上編碼，另一種在獨立的質粒上編碼，可以共表達。融合標簽在基因水平上附著在特定的蛋白質上，使它們更易溶解或更容易被發現和純化。你通常必須嘗試幾種不同的標簽才能知道哪種融合標簽能產生最易溶解的蛋白質。此外，標簽的定位至關重要，它可以位于感興趣的蛋白質的C-未端或N-未端。大多數融合涉及N-未端，這種融合有一個優勢:與C-未端的對應蛋白相比，它通常提高了可溶性蛋白的表達。考慮到融合標簽的可用性可能阻礙重組合成蛋白的生物學功能，在融合蛋白純化后酶促消除標簽可能是有用的。為了便于標簽的去除，建議整合一個對給定序列*特的蛋白酶的分割部分。
