通過調(diào)節(jié)表達增加蛋白質溶解度
使用有效的生產(chǎn)啟動子和高濃度的誘導劑可以在折尋前發(fā)生蛋白質聚集。如果轉錄和翻譯速率降低，新生成的蛋白質在聚集之前將有更多的時間折魯。為了提高蛋白質的溶解性，可以調(diào)整以下幾個典型方面的表達。溫度:如果生產(chǎn)溫度降低到15-25 '℃,重組產(chǎn)生的蛋白質將更易溶解。降低的蛋白質收集、翻譯、轉錄和細胞分裂速率是由于在較低溫度下細胞過程變慢。當表達特定蛋白質的溫度降低時，易受蛋白水解影響的蛋白質的分解速度減慢。引發(fā)劑的效力:重組蛋白的溶解性和活性可以通過降低轉錄速率來增強，這可以通過降低誘導劑的濃度來實現(xiàn)。選擇的媒介:最重組蛋白生產(chǎn)通過分批培養(yǎng)來培養(yǎng)細胞。從一開始就將所有必需的營養(yǎng)物質加入到生長培養(yǎng)基中是至關重要的。
優(yōu)化蛋白質的純化
固定化金屬親和色譜(IMAC)應該用作純化過程的第一階段，
當需要進一步純化時，使用凝膠過濾或尺寸排阻色譜法。必要時，離子交換色譜應該作為“純化"的最后一步
有可能刪除親和標簽以實現(xiàn)額外的純化并減少重組蛋白中存在的非原始序列的數(shù)量。
