正常大鼠巨噬細胞的培養

實驗材料：

1. 成年大鼠或小鼠，采用腹腔取材法

2. 不含Ca2+和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2

3. 培養基：RPMI1640、Ham`s F12等均適于巨噬細胞的培養。大多數巨噬細胞的培養可加10%-40%的血清，小鼠巨噬細胞加10%小牛血清，用無血清培養基亦可。新生小牛血清中含有抗體，能刺激巨噬細胞成熟，也可用乳清蛋白培養

4. 動物解剖臺或蠟板1個，帶鉤眼科鑷子2支，解剖剪1個，10ml注射器1個，針頭數支，離心管2支，吸管數支，培養瓶數個，血細胞計數器1個，Eagle液，肝素（10U/ml）30ml，Eagle培養液（含10%小牛血清和青霉素、鏈霉素）50ml

實驗方法：

1. 實驗前3d，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml；

2. 引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70%乙醇中3-5s。置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁；

3. 再用70%乙醇擦洗腹膜壁后，用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中，同時從兩側用手揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內充分流動；

4. 用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側，使腹壁中液體集中于針頭下吸取入針管內。小心拔出針頭，把液體注入離心管中，1000r/min，離心10min后，去上清，加10ml Eagle培養基；

5. 計數細胞，每只小鼠可產生2×107 —3×107 個細胞，其中90%以上為巨噬細胞。為純化培養細胞，去除其他白細胞，接種數小時后，去除培養液，用Eagle液沖洗1—2次后，除去漂浮的細胞，得到貼壁的巨噬細胞。再加新Eagle培養液置37℃、5%CO2 溫箱中培養。

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