星型膠質(zhì)細(xì)胞原代培養(yǎng)
新生1-2天Wistar大鼠乳鼠，經(jīng)75%酒精消毒，斷頭處死，取腦放入冷的D-Hanks平衡鹽溶液，去除腦膜及大血管。
分離兩側(cè)大腦皮質(zhì)并剪成1mm 3 大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空氣浴震蕩消化10 min，用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基終止消化，離心1000rpm 10min，去上清，再用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸沉淀.
經(jīng)75μm篩網(wǎng)過濾，收集濾液，離心1000rpm 10min，收集沉淀用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸，調(diào)整細(xì)胞密度至1.5×106/ml，種植于75cm 2 培養(yǎng)瓶，經(jīng)1小時(shí)差速黏附去除成纖維細(xì)胞后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到一新的75cm2培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)，兩天換液一次。
7天后將培養(yǎng)瓶放入水平搖床，260rpms 2小時(shí) 37℃,換液棄除小膠質(zhì)細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱平衡1小時(shí)，重新置于水平搖床，260rpms 18小時(shí)37℃，換液棄除少突膠質(zhì)細(xì)胞，用新鮮培養(yǎng)基洗2遍，加入0.25%胰蛋白酶與0.02% EDTA1：1混合液消化、傳代備用。
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