正常大鼠唾液腺上皮細胞的培養

實驗材料：

1. 新生大鼠唾液腺；

2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3. 培養用液：DMEM培養液，添加10%的胎牛血清、5μg/ml胰島素、10 ng/ml表皮生長因子、50 ng/ml氫化可的松、100 IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素。無Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液，使用時添加100 IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；

4. 鼠尾膠原液：先吸取4ml鼠尾膠原溶液放入冰浴中的青霉素小瓶，加入0.5ml的10×DMEM培養基。混勻后，再加入濃度為0.34 mol/L的NaOH 0.1ml快速混合（鼠尾膠原液的配制比例，按鼠尾膠原液與10×DMEM及0.34 mol/L NaOH三者的體積比為8:1:1配制），并立即加到24孔培養板中（每孔0.8ml），于37℃下放置30min；

5. 將配好的鼠尾膠原溶液涂布在預先滅菌處理過的蓋玻片上，使其凝固；

6. 將鼠尾膠原包被的蓋玻片放入24孔培養板內，用D-Hanks液平衡1h，備用；

實驗方法：

1. 在無菌條件下取出新生大鼠（10g）的腮腺或頜下腺組織，仔細分離腺體周圍的結締組織，用無Ca2+ 、Mg2+ 的D-Hanks液將腺組織沖洗干凈；

2. 將腺體組織剪成1—2mm3大小的植塊，洗凈植塊上的血液和粘液；

3. 按一定密度（即植塊與植塊之間相距2mm左右），將植塊種植到包被有鼠尾膠原的蓋玻片上；

4. 加入DMEM培養液。每周換液1次；

5. 細胞長滿后，在細胞傳代的過程中去除植塊。

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