腫瘤細胞培養方法簡介

一、機械刮除法

1、標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位。

2、刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間。

3、用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞。

4、注入培養液繼續培養，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至完全除掉為止。

二、反復帖壁法

1、待細胞生長達一定數量后，倒出舊培養液，用胰酶消化后，Hanks沖洗2次，加入不含血清的培養液，吹打制成細胞懸液。

2、取編號為A、B、C三個培養瓶。首先把懸液接種入A培養瓶中，置溫箱中靜止培養5～20分鐘后，輕輕傾斜培養瓶，讓液體集中瓶角后慢慢吸出全部培養液，再接種入B培養瓶中后，向A瓶中補充少許完全培養液置溫箱中繼續培養。

3、培養B瓶中細胞5～20分鐘后，按處理A的方法，把培養液注入C培養瓶中，再向B瓶補加完全培養基。

三、消化排除法

1、先是用0.5％胰蛋白酶和0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培養基細胞一次，然后再換成新的混合繼續消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養瓶，到半數細胞脫落下來后，便立即停止消化。

2、把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養液置溫箱中培養，向原瓶內也補加新的培養液繼續培養。用此法處理后，成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落，經過幾次反復處理，可能把成纖維細胞除凈。

四、膠原酶消化法

1、可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發現成纖維細胞被除掉后，即終止消化。

2、用Hanks洗滌處理一次后，更換新培養液，繼續培養，可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈，可再次重復。

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