牛或豬大血管原代內皮細胞的分離-灌注酶消化法

實驗材料：

1. 牛或豬

2. PBS，含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml

3. 0.1%Ⅰ型膠原酶

4. 眼科剪，眼科鑷

5. 慕絲線

6. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 分離牛或豬的主動脈等大血管，長15-20cm，用絲線結扎血管各分支后，取出主動脈。放入含青霉素100U/ml和鏈霉素100μg/ml的PBS中，清洗血管，洗凈血跡。

2. 用眼科剪和眼科鑷剔除血管外膜的脂肪和結締組織，用加入抗菌素的PBS沖洗三次。

3. 從血管動脈端注入0.1%Ⅰ型膠原酶溶液，待血管內殘留的PBS全部流出后，結扎血管靜脈端，繼續注入膠原酶溶液，使血管充盈。在室溫下消化約30min。

4. 將血管內消化液收集到滅菌的離心管內，1000r/min，離心10min。吸去上清，加入培養液制成細胞懸液。調整細胞密度至1.5×105 個/ml。

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