初代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)-組織塊培養(yǎng)法
材料與儀器
組織
Hanks 培養(yǎng)液 胰蛋白酶 NaHCO3
吸管 培養(yǎng)瓶 燒杯 眼科剪 眼科鑷
步驟
1. 剪切
把組織小塊（1cm3）置入小燒杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂液二三次以去掉表面血污，吸凈Hanks液，用眼科剪反復(fù)剪切成1mm3塊為止；
2. 擺布
用彎頭吸管吸取若干小塊，置入培養(yǎng)瓶中；用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養(yǎng)瓶底上，小塊相互距離以0.5 cm 為宜，每一25 ml培養(yǎng)瓶底可擺布20~30 塊；
3. 輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，令瓶底向上；注意翻瓶時(shí)勿令組織小塊流動(dòng)，塞好瓶塞，置36.5 ℃溫箱2 小時(shí)左右（勿超過(guò)4 小時(shí)），使小塊微干涸；
4. 培養(yǎng)
從溫臬中取出培養(yǎng)瓶，開(kāi)塞，46 度斜持培養(yǎng)瓶（瓶底仍向上），向瓶底角部輕輕注入培養(yǎng)液小許，然后緩緩再把培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶底上的組織小塊（組織小塊附著尚不牢，注意不要把組織塊沖走）；置溫箱中靜止培養(yǎng)。待細(xì)胞從組織塊游出數(shù)量增多后，再補(bǔ)加培養(yǎng)液。
常見(jiàn)問(wèn)題
一、評(píng)價(jià)
翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶的目的是為使組織塊微干涸，以利附和免從瓶壁流失，但時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，超過(guò)三四小時(shí)以上可能對(duì)組織有不利影響。
組織塊培養(yǎng)法操作簡(jiǎn)便，順利情況下，組織小塊貼壁培養(yǎng)后24 小時(shí)，細(xì)胞即可從小塊邊緣向四周游出，通過(guò)生長(zhǎng)增殖，最終亦可連接成片；原組織小塊可完全散成細(xì)胞而消失。如組織塊過(guò)大，殘留小塊換液時(shí)棄掉或再置另瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
組織塊通過(guò)反復(fù)剪切可能受一定損傷，并非每塊組織都有生長(zhǎng)能力，但只要有一部分能生長(zhǎng)往往即可形成單層。
